廣藿香油誘導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞凋亡的主要藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究.pdf

1、目的：1.研究廣藿香油及其主要單體成分廣藿香醇和廣藿香酮體外抑制人雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞PC3、DU145的生長作用；2.以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡為出發(fā)點(diǎn)，探討其抑制PC3、DU145腫瘤細(xì)胞增殖的作用機(jī)制；3.通過Balb/c裸小鼠皮下種植PC3細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，明確廣藿香油體內(nèi)抑制人雄激素非依賴性前列腺癌生長的效果。
　　方法：1.體外培養(yǎng)人雄激素非依賴性前列腺癌細(xì)胞 PC3、DU145，以四甲基偶氮唑鹽還原法（MTT）作為檢測手段

2、，觀察不同濃度廣藿香油、廣藿香醇、廣藿香酮對上述腫瘤細(xì)胞的生長抑制作用，計(jì)算出IC50；2.采用Balb/c裸小鼠建立前列腺癌PC3細(xì)胞體內(nèi)模型，觀察廣藿香油經(jīng)腹腔注射給藥對模型小鼠的一般情況、小鼠體重、腫瘤體積、相對腫瘤增殖率T/C（％）的影響；3.應(yīng)用透射電鏡觀察，細(xì)胞周期檢測，Annexin V-FITC、PI雙標(biāo)記法流式細(xì)胞儀檢測，Western Blot法檢測不同濃度廣藿香油、廣藿香醇、廣藿香酮對PC3、DU145腫瘤細(xì)胞凋亡

3、形態(tài)、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡率、凋亡相關(guān)蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）、B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2蛋白（Bcl-2）、Bcl-2關(guān)聯(lián)X蛋白（Bax）、Bcl-2同源拮抗劑/Killer（Bak）、凋亡抑制蛋白Livin的表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：廣藿香油及其主要單體成分廣藿香醇和廣藿香酮對 PC3、DU145腫瘤細(xì)胞生長具有不同程度的抑制作用，且作用效果呈時(shí)間-劑量依賴性。廣藿香油、廣藿香醇和廣藿香酮對PC3細(xì)胞24h

4、的IC50濃度分別為89.68μg/ml、167.64μg/ml和211.02μg/ml，48h的IC50濃度分別為79.89μg/ml、101.37μg/ml和105.44μg/ml；作用72h的IC50濃度分別為66.74μg/ml、60.37μg/ml和94.66μg/ml。廣藿香油、廣藿香醇和廣藿香酮對DU145細(xì)胞24h的IC50濃度分別為109.64μg/ml、56.88μg/ml和649.41μg/ml，48h的IC50濃

5、度分別為93.70μg/ml、63.31μg/ml和32.71μg/ml；作用72h的IC50濃度分別為86.88μg/ml、52.45μg/ml和36.83μg/ml。結(jié)果顯示，廣藿香油對PC3、DU145腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用優(yōu)于廣藿香醇和廣藿香酮，廣藿香醇對 PC3、DU145腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用優(yōu)于廣藿香酮。透射電鏡觀察結(jié)果顯示廣藿香油、廣藿香醇和廣藿香酮能誘發(fā)PC3和DU145細(xì)胞出現(xiàn)典型凋亡形態(tài)學(xué)改變，流式細(xì)胞儀檢測提示三

6、種藥物可阻滯細(xì)胞周期于G0/G1期或G2/M期，并使細(xì)胞凋亡率明顯升高，與對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Western Blot檢測提示PC3和DU145細(xì)胞Caspase-3、Bax、Bak的表達(dá)增強(qiáng)，Livin、Bcl-2蛋白的表達(dá)下調(diào)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，與陰性溶劑對照組比較，廣藿香油具有抑制Balb/c裸鼠PC3腫瘤增殖作用，效應(yīng)強(qiáng)度呈藥物劑量依賴性。
　　結(jié)論：廣藿香油及其主要成分廣藿香醇、廣藿香酮具有抑制人雄激素非依