前列腺癌細(xì)胞中的內(nèi)皮素-1研究.pdf

1、目的：研究?jī)?nèi)皮素-1(endothelin-1，ET-1)及其受體(ET<,A>R、ET<,B>R)在激素非依賴性前列腺癌(hormone refractory prostate cancer，HRPC)PC-3細(xì)胞中的表達(dá)；探討表皮生長(zhǎng)因子(epidermal growth factor，EGF)對(duì)PC-3細(xì)胞中ET-1及其受體表達(dá)的影響。為HRPC的治療提供了分子生物學(xué)基礎(chǔ)。 方法：進(jìn)行PC-3細(xì)胞培養(yǎng)，采用RT-PCR法測(cè)

2、定PC-3細(xì)胞中ET-1及其受體ET<,A>R、ET<,B>RmRNA的表達(dá)，同時(shí)采用EGF對(duì)PC-3細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，進(jìn)行如下研究： ①RT-PCR測(cè)定ET-1及其受體ET<,A>R、ET<,B>R mRNA表達(dá)； ②Western blot檢測(cè)ET<,A>R、ET<,B>R蛋白表達(dá)； ③放免檢測(cè)ET-1蛋白分泌的變化： ④RT-PCR法測(cè)定EGF對(duì)PC-3細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)的不同時(shí)間內(nèi)ET-1及其受體ET<,A

3、>R、ET<,B>R mRNA的表達(dá)變化。 ⑤通過(guò)不同劑量EGF干預(yù)后，采用Western blot檢測(cè)ET<,A>R、ET<,B>R蛋白表達(dá)、放免檢測(cè)ET-1蛋白分泌的變化。 結(jié)果：PC-3細(xì)胞中可檢測(cè)到ET-1及ET<,A>R mRNA及其蛋白表達(dá)，但無(wú)ET<,B>R mRNA及蛋白表達(dá)；EGF干預(yù)24h后，ET-1及ET<,A>R mRNA表達(dá)上調(diào)，ET<,A>R蛋白表達(dá)及ET-1分泌增加，與對(duì)照組比較，差異有顯著

4、性(P<0.05)；隨EGF干預(yù)時(shí)間增加，ET-1及ET<,B>RmRNA表達(dá)增加，不同時(shí)間內(nèi)EGF作用對(duì)PC-3細(xì)胞ET-1、ET<,A>R mRNA表達(dá)的影響不同，差異具有顯著性(P<0.05)，呈時(shí)間依賴的特點(diǎn)；不同劑量EGF干預(yù)后，ET<,A>R蛋白表達(dá)及ET-1分泌隨EGF濃度增加而增加，單因素方差分析表明，不同劑量的EGF對(duì)PC-3細(xì)胞ET<,A>R蛋白表達(dá)及ET-1分泌的影響不同，差異具有顯著性(P<0.05)。