控制采后炭疽病高效拮抗菌的選育及作用機理研究.pdf

1、枯草芽孢桿菌能產(chǎn)生大量抗菌物質(zhì)，是具有較好拮抗作用的菌株，本實驗采用離子注入枯草芽孢桿菌獲得誘變菌株，以蘋果采后炭疽病菌為指示菌進行了篩選，并將誘變菌株用于蘋果采后炭疽病的防治效果，還探討了其遺傳穩(wěn)定性、營養(yǎng)要求和發(fā)酵條件、抗菌機制。實驗結(jié)果如下： 1.離子注入枯草芽孢桿菌高效拮抗菌的誘變與篩選 利用低能氮離子對枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)進行注入誘變，獲得誘變菌株。通過平板初篩，篩選出6株對蘋果炭

2、疽病菌有較高抑菌作用的菌株，經(jīng)蘋果果實活體測定從中篩選對蘋果炭疽病有較好作用的菌株。接種方式試驗，表明方式二的效果好于方式一，對蘋果炭疽病表現(xiàn)出較好的保護作用。其中室溫下的防治效果較好菌株為BS80-6，14d時的防效為33.28％；低溫條件下BS100-1、BS100-6、BS80-6、BS120-8的效果較好，30d時的防效分別為98.36％、95.36％、95.52％、93.52％；變溫下各菌株BS80-1、BS100-1、BS1

3、20-8的效果最好，30d時的防效分別為84.59％、75.15％、72.40％。誘變菌株對分生孢子盤抑制作用最好的菌株分別為較BS-CK好的菌株有：BS80-6、BS100-6(室溫)；BS100-1、BS100-6、BS120-8、BS80-6(低溫)，變溫時各菌株對病菌分生孢子盤的作用低于BS-CK。各誘變菌株對潛伏侵染控制效果中，經(jīng)各誘變菌株處理的蘋果室溫下放置20d后，BS80-6、BS120-8、BS80-1對潛伏侵染表現(xiàn)了

4、一定的控病作用。借抗菌三種處理液的抑菌和防病作用中發(fā)酵液的作用最強。 2.枯草芽孢桿菌誘變菌株遺傳穩(wěn)定性的測定 具有遺傳穩(wěn)定性是誘變菌株應(yīng)用價值的前提，本實驗將誘變菌株轉(zhuǎn)接7代，用其測定其對炭疽病的防治效果，結(jié)果表明該菌株在防病效果上具有遺傳穩(wěn)定性。 3.枯草芽孢桿菌誘變菌株的生長和發(fā)酵條件研究 BS80-6(B．subilis-80-6)是經(jīng)離子注入枯草芽孢桿菌誘變獲得的對蘋果炭疽病具有高效拮抗作用的菌

5、株，經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)對其生長所需的營養(yǎng)進行研究的結(jié)果表明：BS80-6生長最佳的碳源為麥芽糖，最佳氮源是蛋白胨，最佳礦質(zhì)元素為氯化鉀，最佳維生素為核黃素。 并通過二次通用旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計方法對BS80-6菌株培養(yǎng)基的最佳組合進行了研究，建立了具有較好預(yù)測性能的培養(yǎng)基反應(yīng)模型，并用試驗數(shù)據(jù)驗證了該模型的可靠性，利用該模型對培養(yǎng)基最優(yōu)組合的營養(yǎng)元素對菌體生長量反應(yīng)規(guī)律及交互作用進行了探討，并對影響該菌株生長的因子進行了比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：BS80

6、-6與BS-CK兩菌株對生長因子的要求不同，五個因子對表示：BS80-6菌株生長影響的順序分別為：核黃素>蛋白胨>pH>KCl>麥芽糖。五個因子對BS-CK菌菌株生長影響大小順序為：pH>KCl>核黃素>蛋白胨>麥芽糖。兩因子交互作用對S80-6菌株生長影響的大小順序為：X<,1>X<,3>>X<,2>X<,5>>X<,1>X<,2>>X<,2>X<,4>>X<,4>X<,5>>X<,2>X<,3>>X<,1>X<,4>>X<,1>X<

7、,5>>X<,3>X<,4>>X<,3>X<,5>,其中僅b<,13>、b<,45>、b<,23>達到顯著水平。兩因子互作對BS-CK 菌株生長影響的大小順序為：X<,2>X<,3>>X<,2>X<,5>>X<,1>X<,4>>X<,2>X<,4>>X<,4>X<,5>>X<,2>X<,3>>X<,1>X<,4>>X<,1>X<,5>>X<,3>X<,4.>X<,3>X<,5>，其中b<,13>、b<,12>、b25達到顯著水平。為提高

8、BS80-6菌株的防治效果，對菌株生長及其抗菌物質(zhì)產(chǎn)生的適宜培養(yǎng)條件進行了初步研究，其中適宜生長的pH值為7.0-8.0，適宜生長的溫度條件為25-28℃，通氣量為250mL三角瓶中裝液量為50mL的條件下有利于菌株生長及抗菌物質(zhì)的產(chǎn)生。并用對兩菌株生長曲線的分析表明，該菌株在發(fā)酵培養(yǎng)72-80h左右生長量達到最大值。 4.枯草芽孢桿菌誘變菌株對蘋果炭疽病菌抗菌機制研究 經(jīng)離子注入誘變枯草芽孢桿菌獲得高效菌株BS80-6