2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、本文以冬棗病害研究中常見的病原菌細交鏈格孢、多隔鐮孢霉和串珠霉為靶標,從森林和菜園土壤中篩選防治三種病原菌的拮抗菌。通過測定對不同病原菌的拮抗能力,確定拮抗菌的抑菌譜,從中篩選具有研究和開發(fā)價值的拮抗菌研究。對具有較好拮抗作用和較寬抑菌譜的拮抗菌B26確定其分類學地位;通過正交試驗和單因子實驗,研究B26產(chǎn)生拮抗物質(zhì)的最優(yōu)條件;并進一步研究拮抗菌粗蛋白對溫度、酸堿度、紫外線照射、有機溶劑、蛋白酶的穩(wěn)定性,結果如下:
  從土壤中分

2、離篩選出的11株對細交鏈格孢、多隔鐮孢霉和串珠霉具有較好抑制作用的拮抗菌。平板對峙實驗結果表明:B26的抑菌效果最顯著,對細交鏈格孢的平均抑菌圈半徑為15.8 mm,抑制率達78.8%;對多隔鐮孢霉和串珠霉的平均抑菌圈半徑分別為14.3 mm和12.8 mm,抑制率分別為71.3%和63.8%,具有進一步研究的價值。通過觀察在PDA培養(yǎng)基上生長的形態(tài)學特征、結合生理生化實驗以及PCR產(chǎn)物測序結果,鑒定B26為枯草芽孢桿菌(Bacillu

3、s subtilis)。
  通過正交試驗設計對培養(yǎng)基成分及用量進行優(yōu)化,單因子實驗對B26產(chǎn)生活性物質(zhì)的發(fā)酵條件進行選擇。B26在種子培養(yǎng)基擴大培養(yǎng)后接入不同成分的發(fā)酵培養(yǎng)基,獲得產(chǎn)生拮抗效果最好的培養(yǎng)基成分的用量是:蛋白胨25 g,淀粉40 g,氯化鈉1.5 g,硫酸銨0.8 g,磷酸氫二鉀1.5 g;產(chǎn)生活性物質(zhì)的最優(yōu)發(fā)酵條件為:種子菌齡24 h,接種量5%,初始pH7,裝液量20%,吐溫80用量0.5%,發(fā)酵溫度為30℃,

4、轉(zhuǎn)速150rpm,發(fā)酵時間為60 h,獲得B26菌株發(fā)酵液對多隔鐮孢霉的抑制直徑為26mm,大于其他條件培養(yǎng)獲得的拮抗菌直徑。
  枯草芽孢桿菌B26發(fā)酵液在4℃,經(jīng)8000rpm,離心20 min后,過0.45μm微孔濾膜后,用70%的硫酸銨沉淀,透析后獲得仍具有拮抗細交鏈格孢、多隔鐮孢霉和串珠霉活性的無菌粗蛋白。進一步通過實驗檢測粗蛋白對溫度、酸堿度、紫外線照射、有機溶劑和蛋白酶處理的穩(wěn)定性,結果表明:B26的粗蛋白經(jīng)100℃

5、,20 min處理后,仍是常溫處理下抑菌直徑的78.2%,對高溫具有一定的耐受性;但經(jīng)121℃,20 min處理后,B26粗蛋白完全失去活性;粗蛋白在pH3-pH10范圍內(nèi)都具有抑菌活性,具有較寬的pH適應范圍,但在pH為7時抑菌能力最高,所以應注意B26抑菌蛋白的純化應在偏中性的條件下進行;粗蛋白對紫外線照射有部分敏感性,B26的抑菌粗蛋白經(jīng)距離40 cm,20W紫外燈照射80 min后,抑菌活性是對照的78.1%;有機溶劑對枯草芽孢

6、桿菌B26的抑菌粗蛋白的抑菌活性影響很小,經(jīng)過乙醚,甲醇,氯仿,和丙酮有機溶劑處理過的粗蛋白的抑菌活性分別為對照的96.4%、85.7%、82.1%、81.5%;B26的抑菌粗蛋白對三種蛋白酶具有部分敏感性,B26的抑菌粗蛋白經(jīng)過蛋白酶K處理后,拮抗直徑活性為15.2 mm,為對照的76.7%,經(jīng)過胰蛋白酶處理的拮抗直徑為16.2 mm,是未處理的81.8%,而經(jīng)過胃蛋白酶處理過的,拮抗直徑為16.3 mm,抑制率是未處理的83.3%。

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