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1、喉鱗狀細(xì)胞癌簡(jiǎn)稱喉癌(laryngeall squamous cell carcinoma,,LSCC)是我國(guó)北方地區(qū)高發(fā)的頭頸部惡性腫瘤。對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)周期進(jìn)行精確調(diào)控,維持細(xì)胞正常生長(zhǎng)發(fā)育平衡是阻止喉癌發(fā)生、發(fā)展的有效途徑,也是成功治療喉癌的關(guān)鍵。細(xì)胞周期蛋白是真核細(xì)胞周期循環(huán)中主要的調(diào)節(jié)因子,在人類腫瘤細(xì)胞中,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)多種細(xì)胞周期蛋白的異常表達(dá)。CyclinG是細(xì)胞周期蛋白家族中發(fā)現(xiàn)較晚的新成員,cyclinG1和cyclinG2在結(jié)
2、構(gòu)上具有高度同源性,但在功能上似乎各自發(fā)揮著特有的生物學(xué)功能。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組化(S-P)方法對(duì)52例原發(fā)性喉鱗狀細(xì)胞癌及其相鄰正常黏膜組織新鮮標(biāo)本中cyclinG1、G2蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測(cè),分析其與喉癌的組織病理分級(jí)、臨床分期以及解剖分型的關(guān)系,以探討cyclinG1、G2蛋白表達(dá)與喉癌的可能相關(guān)性。 材料與方法: 1、標(biāo)本 52例喉癌標(biāo)本均來(lái)自中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院,經(jīng)病理切片確診。其相鄰正常黏膜組織(手術(shù)切
3、緣癌旁1.0cm外黏膜組織)作為對(duì)照組。所有患者術(shù)前均未行放療和化療,均無(wú)遠(yuǎn)隔器官轉(zhuǎn)移。 2、免疫組化染色 免疫組化(S-P)法,以細(xì)胞核和/或胞漿呈棕黃色染色為陽(yáng)性,隨機(jī)選取5個(gè)非重疊高倍視野,計(jì)算染色細(xì)胞百分比,陽(yáng)性為染色細(xì)胞數(shù)≥5%,陰性為染色細(xì)胞數(shù)<5%。 3、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所得數(shù)據(jù)應(yīng)用Pearsonx<'2>檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果: 免疫組化染色結(jié)果:CyclinG1蛋白表達(dá)陽(yáng)
4、性部位位于細(xì)胞核,而cyclinG2位于細(xì)胞漿中。喉癌及其相鄰正常黏膜組織中cyclinG1蛋白表達(dá)陽(yáng)性百分比分別為82.69%(43/52)和30.77%(16/52);cyclinG2分別為21.15%(11/52)和16.54%(32/52)。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理結(jié)果提示cyclinG1蛋白在喉癌中表達(dá)增高,而cyclinG2蛋白表達(dá)降低。CyclinG1、cyclinG2蛋白在喉癌及其相鄰正常黏膜組織中表達(dá)差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.0
5、1)。 CyclinG1蛋白在高分化、中分化、低分化喉癌中表達(dá)陽(yáng)性百分比分別為47.62%(10/21)、72.22%(13/18)和92.31%(12/13);cyclinG2蛋白表達(dá)陽(yáng)性百分比分別為42.86%(9/21)、22.22%(4/18),17.69%(1/13)。CyclinG1蛋白在I~Ⅱ期和Ⅲ~Ⅳ期喉癌中表達(dá)陽(yáng)性百分比分別為65.00%(13/20)和93.75%(30/32);cyclinG2蛋白表達(dá)陽(yáng)性百
6、分比分別為40.00%(8/20)和9.38%(3/32)。CyclinGl蛋白表達(dá)增高和cyclinG2蛋白表達(dá)降低與喉癌的病理分級(jí),臨床分期有關(guān),組織分化程度越低,臨床分期越高,cyclinG1蛋白表達(dá)增高越明顯,而cyclinG2蛋白表達(dá)降低越明顯。差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。 CyclinG1蛋白在聲門型、聲門上型喉癌中表達(dá)陽(yáng)性百分比分別為82.14%(23/28)、83.33%(20/24); cyclinG
7、2蛋白在聲門型、聲門上型喉癌中表達(dá)陽(yáng)性百分比分別為21.43%(6/28)、20.83%(5/24)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析cyclinG1、G2蛋白表達(dá)與喉癌的解剖分型無(wú)相關(guān)性(p>0.05)。 討論: CyclinG1基因由Tamura等于1993年發(fā)現(xiàn),定位于5q32-34,第一個(gè)內(nèi)含子中有p53蛋白結(jié)合位點(diǎn)。Cyclin G1蛋白主要定位于細(xì)胞核,在骨胳肌中表達(dá)水平最高,其次在卵巢、腎臟和結(jié)腸組織中也有較高水平的表達(dá)。但c
8、yclinG1并非為細(xì)胞增殖負(fù)性調(diào)節(jié)因子。在部分骨肉瘤中cyclin G1呈高表達(dá),cyclin G1反義RNA表達(dá)減緩骨肉瘤細(xì)胞增殖,有促進(jìn)細(xì)胞增長(zhǎng)作用。此外,Smith等將cyclin G1 cDNA導(dǎo)入人大腸癌細(xì)胞和正常人成纖維細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)cyclin G1表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞增殖。 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示cyclinG1蛋白在喉癌組織中表達(dá)較其相鄰正常黏膜組織中表達(dá)增高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。研究發(fā)現(xiàn)cyclinG1的持續(xù)性高水平表達(dá),對(duì)p
9、53的轉(zhuǎn)錄活性反應(yīng)遲鈍。過(guò)多的cyclinG1通過(guò)與PP2A結(jié)合使MDM2去磷酸化,促進(jìn)MDM2介導(dǎo)的p53泛素化,加速p53的降解,從而表現(xiàn)為對(duì)p53的負(fù)反饋?zhàn)饔?,抑制?xì)胞的凋亡,導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞無(wú)限制增長(zhǎng)。CyclinG1蛋白的改變可能與喉癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。應(yīng)用順鉑、阿霉素等藥物處理細(xì)胞后發(fā)現(xiàn)G2/M期阻滯的細(xì)胞比例與cyclinG1的表達(dá)明顯正相關(guān),推測(cè)cyclinG1可能與細(xì)胞周期G2/M檢查點(diǎn)調(diào)控有關(guān)。 Home等首先報(bào)道了
10、cyclin G2基因克隆,其蛋白主要定位在細(xì)胞質(zhì)中。Bates等的研究表明cyclin G1和cyclin G2的mRNA表達(dá)都能被DNA損傷藥物放線菌素D誘導(dǎo),不同的是對(duì)cyclin G2的誘導(dǎo)表達(dá)呈p53非依賴性。當(dāng)B細(xì)胞的增殖受抑制或發(fā)生細(xì)胞周期阻抑時(shí),cyclin G2轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)。Wykoff等將抑癌基因VHL重新導(dǎo)入已存在該基因缺陷的腎癌細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因誘導(dǎo)表達(dá)的一系列靶基因中包括cyclin G2。Kim Y等在人口腔癌
11、中檢測(cè)到cyclin G2基因表達(dá)的減低。劉潔等應(yīng)用腺病毒載體轉(zhuǎn)染胃腺癌細(xì)胞系SGC-7901,cyclin G2基因有抑制其增殖的作用。本研究中cyclin G2蛋白在喉癌組織中表達(dá)較其相鄰正常黏膜組織中表達(dá)降低,與上述研究結(jié)果一致,均表明cyclin G2可能是細(xì)胞周期的負(fù)性調(diào)控因子。喉癌中cyclin G2蛋白表達(dá)降低提示其可能與喉癌的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制相關(guān)。 結(jié)論: 1、喉癌中cyclin G1蛋白表達(dá)增高,cycl
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