單核細胞趨化因子在卡介苗誘導膀胱局部抗腫瘤免疫反應中的作用及機制.pdf

1、目的:探討單核細胞趨化因子(MCP-1)對腫瘤浸潤淋巴細胞(TIL)細胞增殖的作用以及能否增加TIL對膀胱腫瘤細胞的細胞毒性,觀察卡介苗(BCG)膀胱灌注治療后,膀胱腫瘤中單核細胞趨化因子(MCP-1)鐘聲蛋白樣受體(TLR4,TLR2),以及核轉錄因子κB(NFκB)的表達,進而討論MCP-1在BCG誘導的膀胱腫瘤的局部抗瘤免疫反應中的具體過程和機制.方法:用Rosenberg<'[1]>的方法從膀胱癌組織中分離TIL.體外在IL-2

2、和MCP-1作用下培養(yǎng)TIL,用細胞記數(shù)法測定細胞增殖.觀察在不同濃度的MCP-1的作用下,不同時間相對應的TIL增殖的變化;于體外在IL-2和MCP-1作用下培養(yǎng)TIL作為效應細胞,以膀胱癌細胞系EJ作為靶細胞,用MTT釋放實驗測定TIL對腫瘤細胞的細胞毒殺傷作用;用MTT法[2]測定不同濃度的MCP-1作用后的TIL細胞毒性的影響.收集膀胱腫瘤電切(TUR)術標本,分別提取標本組織中的總RNA,用MCP-1,TLR4,TLR2,NF

3、κB的寡核苷酸引物進行RT-PCR擴增,產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后,用凝膠成像系統(tǒng)檢測原發(fā)膀胱移行細胞癌標本、正常膀胱黏膜以及BCG灌注治療后膀胱移行細胞癌復發(fā)標本中MCP-1,TLR4,TLR2,NFκB mRNA的表達;用免疫組化的方法測定NFκB(P65)在各標本中的表達.結論:一定濃度的MCP-1可促進TIL細胞的增殖,并可增加TIL對EJ細胞的細胞毒性.膀胱腫瘤電切術后,經(jīng)BCG灌注治療,其復發(fā)腫瘤標本中MCP-1,TLR4,TL