骨髓基質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)成骨能力的研究及用組織工程方法構(gòu)建復(fù)合人工骨的初步研究.pdf

1、第一部分:兔骨髓基質(zhì)細(xì)胞的分離、體外培養(yǎng)及使用地塞米松誘導(dǎo)后,行細(xì)胞計(jì)數(shù)、MTT檢測(cè)、ALP檢測(cè),并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析.在不同濃度地塞米松作用下,細(xì)胞數(shù)量、MTT法檢測(cè)OD值和ALP檢測(cè)OD值呈現(xiàn)一定的變化趨勢(shì).其中,在地塞米松濃度為10<'-8>M時(shí),細(xì)胞數(shù)量最多,MTT檢測(cè)OD值也最大;ALP檢測(cè)OD值隨著地塞米松濃度的增加而增大.表明地塞米松對(duì)兔骨髓基質(zhì)細(xì)胞在體外培養(yǎng)過(guò)程中能較好的誘導(dǎo)其向成骨細(xì)胞方向分化.第二部分:觀察rhBMP-2

2、和TGF-β對(duì)兔骨髓基質(zhì)細(xì)胞(MSC)在體外培養(yǎng)條件下對(duì)其分化和增殖的影響,取兔骨髓基質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng),穩(wěn)定傳代后,采取分別單獨(dú)加入rhBMP-2,TGF-β等誘導(dǎo)因子方法觀察MSC的成長(zhǎng)分化,采用MTT方法以及堿性磷酸酶染色的方法觀察上述因子對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)分化和增殖的影響.實(shí)驗(yàn)可以看出rhBMP-2及TGF-β對(duì)體外培養(yǎng)兔骨髓基質(zhì)細(xì)胞的憎殖和分化的作用是各不同的,rhBMP-2對(duì)兔骨髓基質(zhì)細(xì)胞的作用主要表現(xiàn)為促進(jìn)其分化,TGF-β的作用主要

3、為促進(jìn)其增殖.第三部分:在體外培養(yǎng)條件下,用地塞米松誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)細(xì)胞形成骨髓基質(zhì)成骨細(xì)胞(MSO),作為種子細(xì)胞與支架材料聚β羥基丁酯(PHB)相復(fù)合,構(gòu)成MSO/PHB復(fù)合人工骨,移植于無(wú)免疫動(dòng)物皮下,并進(jìn)行組織切片檢查、圖像分析等方法,觀察其成骨情況.MSO/PHB復(fù)合人工骨在無(wú)免疫動(dòng)物皮下異位成骨作用明顯,兼有膜內(nèi)成骨和軟骨內(nèi)成骨作用的特點(diǎn),以膜內(nèi)成骨為主,成骨量隨時(shí)間的增加而增加,且優(yōu)于MSC/PHB組.通過(guò)上述試驗(yàn)可以看出,骨