轉基因骨髓基質干細胞復合凍干骨組織工程骨研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目前,深凍骨已商品化,免疫排斥反應罕見發(fā)生,故該實驗以凍干松質骨作為基質材料、轉染有血管內皮細胞生長因子(VEGF)的骨髓基質干細胞(BMSC)為種子細胞,這樣既保持了骨組織優(yōu)良的空間結構,又提供了種子細胞和血管化的刺激因子.希望能為骨缺損及缺血性骨病治療提供實驗和理論依據.1、兔骨髓基質干細胞的體外培養(yǎng)目的:在體外進行骨髓基質干細胞的培養(yǎng)和擴增,觀察其形態(tài)學特點,為進一步研究基因轉染對骨髓基質干細胞體外轉化的影響和繪制生長曲線加以比較

2、奠定工作基礎.方法:貼壁法分離兔骨髓基質干細胞,37℃,5％CO<,2>培養(yǎng)箱培養(yǎng),觀察原代及傳代細胞的生長發(fā)育情況,并繪制生長曲線;在礦化液中連續(xù)培養(yǎng),觀察其骨形成能力.2、逆轉錄病毒表達載體的構建目的:構建高效的逆轉錄病毒表達載體,為下一步實驗作準備.方法:將pT7Blue/hVEGF<,165>質粒酶切獲得hVEGF<,165>基因片段,構建pcDNA<,3>/hVEGF<,165>并用PA317細胞包裝,32℃G418培養(yǎng)48h

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