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1、胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)是由70個(gè)氨基酸殘基組成的蛋白質(zhì).在本該的研究工作中,以大鼠基因組DNA為模板采用外顯子拼接法成功得括增出大鼠IGF-1基因成熟肽編碼序列;經(jīng)限制性內(nèi)節(jié)酶處理后,將其克隆入pUC18質(zhì)粒,并在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步構(gòu)建了表達(dá)型重組質(zhì)粒pGEX-IGF-1.經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)、親和層析純化后獲得了融合蛋白GST-IGF-1,經(jīng)WestenmBlot檢驗(yàn)證明融合蛋白具有IGF-1的免疫活性.以Xa因子對(duì)融合蛋白進(jìn)行酶切使IG
2、F-1與擔(dān)體蛋白分離,超波離心后得到了重組大鼠IGF-1純品.以市售試劑級(jí)重組人IGF-1作為對(duì)照,采用H<,3>TdR摻入法對(duì)重組大鼠IGF-1的生物活性進(jìn)行了檢測(cè),證明其具有生物活性.實(shí)驗(yàn)中以融合蛋白GST-IGF-1作為抗原對(duì)雞進(jìn)行了免疫從雞蛋中提取到了抗IGF-1的特異性卵黃免疫球蛋白,并利用抗IGF-1多克隆抗體IgY作為捕獲抗體和檢測(cè)抗體,建立了血清中IGF-1雙抗體夾心酶免疫檢測(cè)方法.在成功的構(gòu)建了pUC-IGF-1質(zhì)粒的
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