結(jié)直腸癌中差異表達miRNA的篩選與功能研究.pdf

1、第一部分結(jié)直腸癌組織中差異表達miRNA的篩選及其調(diào)控靶基因的確定
　　目的:研究結(jié)直腸癌中全基因組水平上miRNA-mRNA相互調(diào)控關(guān)系，明確結(jié)直腸癌中差異表達的miRNA下游的靶基因及其調(diào)控的信號通路。方法:利用miRNA芯片及mRNA芯片確認結(jié)直腸癌組織中miRNA及mRNA表達譜;應(yīng)用Pearson相關(guān)性分析，選取表達水平呈明顯負相關(guān)的miRNA-mRNA對，通過生物信息學(xué)篩選具有直接調(diào)控關(guān)系的miRNA-mRNA對，分析

2、其參與的信號通路。應(yīng)用realtimePCR及細胞實驗驗證預(yù)測結(jié)果。結(jié)論:通過芯片分析，共篩選出32個差異表達的miRNA及2916個差異表達的mRNA，應(yīng)用芯片表達水平相關(guān)性分析及靶點預(yù)測軟件共篩選出72對表達水平呈明顯負相關(guān)的miRNA-mRNA對。其中包括22個差異表達的miRNA及58個差異表達mRNA，通過信號通路分析表明wnt通路可能受這些差異表達的miRNA調(diào)控。realtimePCR在40例樣本中對miRNA及mRNA表

3、達水平進行驗證，結(jié)果與芯片結(jié)果一致。細胞實驗發(fā)現(xiàn)KLF4可能是mir-29a的靶基因。
　　結(jié)論:本研究共預(yù)測了在結(jié)直腸癌中miRNA-mRNA調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，確認了結(jié)直腸癌中差異表達的miRNA的靶基因，為進一步機制研究提供線索。
　　第二部分:Mir-29a通過調(diào)控KLF4參與結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的研究
　　目的:研究mir-29a在伴有肝轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織中表達水平，探討其與臨床病理特征的聯(lián)系，明確mir-29a在結(jié)直腸癌組

4、織中表達水平與KLF4蛋白表達水平的相關(guān)性。方法:在68例結(jié)直腸癌患者中應(yīng)用realtimePCR檢測mir-29a表達水平，應(yīng)用組織芯片檢測結(jié)直腸癌組織中KLF4表達水平。結(jié)論:mir-29a在伴有結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移患者中表達水平明顯上調(diào)，KLF4表達水平在伴有肝轉(zhuǎn)移及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中下調(diào)，mir-29a在結(jié)直腸癌中的表達水平與KLF4負相關(guān)。
　　結(jié)論:mir-29a在伴有肝轉(zhuǎn)移的結(jié)直腸癌組織中表達上調(diào)，其表達水平與KLF4蛋白