離體培養(yǎng)紅豆杉細(xì)胞次生代謝啟動(dòng)機(jī)制研究.pdf

1、華中理工大學(xué)博士學(xué)位論文離體培養(yǎng)紅豆杉細(xì)胞次生代謝啟動(dòng)機(jī)制研究姓名：蘇湘鄂申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：生物醫(yī)學(xué)工程指導(dǎo)教師：梅興國(guó)2000.4.1華中理工大學(xué)博士學(xué)位論文和紫杉醇含量也明顯高于原型。4借鑒刺激動(dòng)物免疫產(chǎn)生抗體的方法，設(shè)計(jì)了小劑量連續(xù)誘導(dǎo)方案，并且比較了小劑量連續(xù)誘導(dǎo)與一次性大劑量加入誘導(dǎo)子在’細(xì)胞活力、H20，含量、POD活力、生物量和紫杉醇含量等方面的差異。結(jié)果表明：(1)小劑量連續(xù)誘導(dǎo)具有減輕一次性大劑量添加誘導(dǎo)子對(duì)細(xì)胞

2、的毒害作用，并可獲得更強(qiáng)的誘導(dǎo)效應(yīng)的優(yōu)點(diǎn)。(2)多種誘導(dǎo)子組合使用對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有影響，但對(duì)紫杉醇單位含量的提高更有利。5測(cè)定了紅豆杉細(xì)胞一個(gè)生長(zhǎng)周期中的分裂指數(shù)，研究了處于不同生長(zhǎng)周期時(shí)相的紅豆杉細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)后生活力、生物量、紫杉’醇含量及POD活力、H20，含量等幾個(gè)與次生代謝有關(guān)的生理生化指標(biāo)的差異，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)周期時(shí)相、細(xì)胞分裂指數(shù)與紫杉醇合成的關(guān)系作了初步探討。結(jié)果表明：細(xì)胞的分裂高峰時(shí)期在6—8天，而在正處于分裂高峰期的第7天加入誘

3、導(dǎo)子，細(xì)胞生活力、POD活力、H，0，含量、紫杉醇含量都是最高的，由此可見(jiàn)，處于分裂相的細(xì)胞有可能對(duì)誘導(dǎo)子更敏感。6對(duì)低溫誘導(dǎo)同步化的方法及低溫誘導(dǎo)同步化對(duì)紅豆杉細(xì)胞√次生代謝的影響進(jìn)行了研究，結(jié)果表明：細(xì)胞經(jīng)2。C處理12h，恢復(fù)12h可提高分裂指數(shù)115％，經(jīng)6‘C處理24h，恢復(fù)12h可將分裂指數(shù)提高776％2。C處理降低了細(xì)胞活力，細(xì)胞褐化嚴(yán)重，紫杉醇含量不高。6。C處理顯著提高了細(xì)胞活力和紫杉醇含量。7在本實(shí)驗(yàn)室以前工作的基礎(chǔ)

4、上，選取九種前體和兩種旁路抑制劑，各取兩種濃度水平，以紫杉醇含量作為檢測(cè)指標(biāo)進(jìn)行11因素二水平的正交實(shí)驗(yàn)來(lái)分析這11種因素對(duì)紫杉醇含量的影響，獲得了一最優(yōu)方案，并對(duì)這一方案在15L反應(yīng)器中進(jìn)行了檢驗(yàn)。結(jié)果表明：前體中D一苯丙氨酸、苯異絲氨酸、苯甲酸鈉、甲瓦龍酸0內(nèi)酯、檸檬酸銨、乙酸鈉對(duì)紫杉醇合成影響極為顯著，0【一苯丙氨酸、草酸銨作用顯著，甘氨酸的作用不顯著兩種代謝抑制劑中，肉桂酸對(duì)紫杉醇合成影響顯著，ccc則不顯著在15L機(jī)械攪拌式、