乙酰肝素酶和基質金屬蛋白酶-9在非小細胞肺癌中的表達及臨床意義.pdf

1、目的：通過檢測乙酰肝素酶(heparanase,HPA)和基質金屬蛋白酶-9(matrix metal loproteinases-9,MMP-9)在非小細胞肺癌(NSCLC)與正常肺部組織中的表達,初步探討HPA和MMP-9在NSCLC的發(fā)生、浸潤、轉移中的作用。方法：用免疫組化SP法檢測120例NSCLC組織(鱗癌60癌,腺癌60例)和30例正常肺部組織中HPA和MMP-9的表達水平。NSCLC組織標本均取自四川省瀘州醫(yī)學院附屬醫(yī)院

2、病理科,所有患者均未作任何放療或化療。30例正常肺部組織標本作對照。根據NSCLC標本組織分化程度將高-中分化分為第一組,低分化分為第二組;根據病理類型鱗癌為第一組,腺癌為第二組;根據患者臨床及病理相關信息進行TNM分期:I期為第一組, Ⅱ-Ⅲ期為第二組,Ⅳ期為第三組。所有組織標本用10％福爾馬林固定,以石蠟包埋,進行常規(guī)4μm連續(xù)切片。經石蠟切片進行常規(guī)脫蠟為無水后,蒸餾水予以沖洗,磷酸鹽緩沖液(phosphate buffer sa

3、line, PBS)浸泡5min。高壓高熱修復抗原,然后取3％過氧化氫甲醇液孵育10min以便清除內源性過氧化酶的活性。其次取正常山羊血清封閉交叉反應產生的非特異性著色。滴加一抗(HPA兔抗人多克隆抗體的稀釋度為1:50;MMP-9兔抗人多克隆抗體的稀釋度為1:100)孵育,用PBS沖洗,以PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照。滴加生物素標記二抗進行孵育,又用PBS沖洗,滴加辣根酶標記鏈酶卵白素工作液(S-A/HRP)進行孵育,再用PBS沖

4、洗,DAB顯色, Mayer蘇木精溶液輕度復染,酸化,藍化,梯度脫水,透明,封片,最后用顯微鏡進行觀察。要注意控制背景。HPA陽性主要表達于腫瘤細胞胞漿中,少數(shù)表達于細胞核內,均呈細顆粒狀或團塊狀;MMP-9陽性主要表達于腫瘤細胞胞漿和胞膜中,呈細顆粒狀或團塊狀,散在點狀分布。按每張切片陽性細胞比例數(shù)、著色深淺劃分為-、+、++、+++共四個等級,以幾乎不著色或著色細胞少于5％為(-),著色較淡或著色細胞占整張切片5％-25％為弱陽性(

5、+),著色適中或著色細胞占整張切片26％-50％中度陽性(++),著色較深或著色細胞占整張切片大于50％強陽性(+++)。結果:⑴NSCLC組與正常肺部組織組比較,HPA的表達水平和MMP-9的表達水平均不同,且NSCLC組的HPA與MMP-9表達水平均高于正常肺部組織,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。⑵腺癌組和鱗癌組的HPA表達水平差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),而腺癌組和鱗癌組的MMP-9表達水平差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)

6、。⑶根據NSCLC的分化程度,低分化組的HPA和MMP-9表達水平均較高-中分化組高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。⑷根據TNM分期,I期組﹑Ⅱ-Ⅲ期組和Ⅳ期組的HPA和MMP-9表達水平不全相同,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。且經兩兩比較,Ⅱ-Ⅲ期組HPA和MMP-9表達水平高于I期組,Ⅳ期組的HPA和MMP-9表達水平高于I期組﹑Ⅱ-Ⅲ期組,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。⑸根據等級相關分析, HPA與MMP-9在非小細胞