Myroilysin脫細胞異種神經支架的制備及生物力學性能研究.pdf

1、周圍神經缺損可直接導致機體感覺或運動功能的喪失，并增加了二次并發(fā)癥的風險，進而嚴重影響機體正常功能的行使，有的甚至需要終生維持治療，不但影響了患者的生活質量，甚至給社會經濟造成了不同程度的影響。周圍神經缺損的修復是神經創(chuàng)傷研究的難點。目前，自體神經移植(autologous nervetransplantation，ANT)仍是治療周圍神經缺損的“金標準”，但其存在來源不足，不能修復大范圍神經缺損等缺點。將應用組織工程學的方法和原理制備

2、出的脫細胞異種神經支架，運用于修復周圍神經的大范圍缺損便成為此研究領域的熱點。本課題正是基于上述理念，制備一種新型的人工神經移植物并對其生物力學性能進行評價。
　　第一部分、Myroilysin脫細胞異種神經支架的制備
　　目的:獲取一種新型的脫細胞異種神經支架。
　　方法:獲取健康Wistar大鼠雙側坐骨神經(15mm)后，應用Myroilysin酶的不同活性濃度對其進行脫細胞處理，肉眼觀察及制作組織切片經HE染色、

3、Masson染色后光學顯微鏡下觀察此脫細胞異種神經支架的膠原結構、所保留神經基底膜結構以及整體的脫細胞效果。
　　結果:肉眼觀察可見高濃度的Myroilysin酶(500IU/mL，600IU/mL)所制備出脫細胞異種神經支架已幾乎完全被溶解掉，其長度較實驗前明顯縮短，余均可見體積較正常神經有明顯膨脹現(xiàn)象，且色澤透明。組織學觀察，HE染色鏡下可見低濃度的Myroilysin酶(200IU/mL，300IU/mL)所制備出的脫細胞異

4、種神經支架有大量細胞核的殘留。Masson染色鏡下可見不同濃度Myroilysin酶所制備出的脫細胞異種神經支架膠原纖維的排列都較規(guī)則，但隨著濃度的增高膠原纖維間的間隙逐漸增大。通過多次反復實驗我們最終確定400IU/mL的Myroilysin酶脫細胞效果最佳。
　　結論:Myroilysin酶法是一種新型的脫細胞異種神經支架的制備方法;且通過肉眼觀察及組織學觀察，400IU/mL的Myroilysin酶脫細胞效果最佳。
　

5、　第二部分、Myroilysin與Sondell脫細胞神經支架的對比觀察
　　目的:比較Myroilysin酶法與Sondell化學法制備的脫細胞異種神經支架的異同。
　　方法:獲取健康Wistar大鼠雙側坐骨神經(15mm)后，分別應用400IU/mLMyroilysin酶和經典Sondell化學法對其進行脫細胞處理。肉眼觀察并制作組織切片，切片經HE染色及Masson染色后光學顯微鏡下觀察脫細胞異種神經支架的膠原結構、所

6、保留神經基底膜結構以及整體的脫細胞效果。同時制作電鏡標本在掃描電鏡下觀察不同脫細胞神經支架的表面物理性狀。
　　結果:兩種方法所獲得的神經支架相比，Myroilysin脫細胞異種神經支架的直徑及體積要明顯大于Sondell脫細胞神經支架。與天然神經相比，兩者的直徑及體積均大于天然神經，但Myroilysin脫細胞異種神經支架較天然神經更明顯膨脹，且色澤透明，Sondell脫細胞異種神經支架的直徑只略大于天然神經。組織學觀察，HE染

7、色兩種支架均可見細胞核、軸突、髓鞘結構消失;神經基底膜結構紅染，呈波浪狀，但與Sondell神經支架相比， Myroilysin神經支架排列均勻一致且連續(xù)性好。Masson染色可見，Sondell神經支架膠原纖維排列不規(guī)則，且纖維結構的連續(xù)性差，部分纖維結構已被破壞，而Myroilysin神經支架排列相對規(guī)則且連續(xù)。
　　結論:通過上述比較可知，Myroilysin酶法將成為一種新型的且更具有優(yōu)勢的神經支架的制備方法。
　　

8、第三部分、Myroilysin脫細胞異種神經支架的生物力學性能
　　目的:應用生物力學測試儀器，評價Myroilysin脫細胞異種神經支架的生物力學性能，為后期的體內實驗研究做準備。
　　方法:應用Endura TEC ELF3200力學測試儀器，通過測試正常神經（A組）、Sondell化學法（B組）及Myroilysin酶法（C組）獲得的脫細胞異種神經支架的極限載荷、彈性模量、韌度、極限應力、極限應變、斷裂功耗等生物力學性

9、能指標，比較三者之間的生物力學性能差異有無統(tǒng)計學意義。測試數(shù)據(jù)結果用均數(shù)±標準差表示，采用SPSS16.0進行統(tǒng)計分析，組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用LSD檢驗。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果:P值均大于0.05，即A、B、C三組在極限載荷、彈性模量、韌度、極限應力、極限應變、斷裂功耗等生物力學特性方面的差異無統(tǒng)計學意義。
　　結論:與Sondell脫細胞神經支架及正常神經相比，Myroilysi