季節(jié)變化對(duì)呼吸系統(tǒng)免疫調(diào)節(jié)機(jī)制影響的研究.pdf

1、本課題以“天人相應(yīng)”理論和肺衛(wèi)理論為基礎(chǔ)，就季節(jié)變化對(duì)呼吸系統(tǒng)免疫物質(zhì)的影響提出假設(shè)，以期驗(yàn)證其與免疫物質(zhì)的活動(dòng)變化相關(guān)性，為臨床上常見(jiàn)的呼吸系統(tǒng)疾病季節(jié)性發(fā)病提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，同時(shí)在預(yù)防和保健領(lǐng)域亦具有重要的參考價(jià)值。
　　 本實(shí)驗(yàn)內(nèi)容主要包括以下三部分：
　　 第一部分：季節(jié)變化對(duì)健康大鼠肺組織IL-1β、IL-2、IL-6、IL-10和SP-A表達(dá)的影響目的：通過(guò)觀(guān)察季節(jié)變化過(guò)程中大鼠肺組織IL-1β、IL-2、

2、IL-6、IL-10和SP-A的表達(dá)，探討季節(jié)變化對(duì)大鼠肺臟免疫調(diào)節(jié)的作用機(jī)制，為呼吸系統(tǒng)季節(jié)性發(fā)病的病理生理機(jī)制的認(rèn)識(shí)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：清潔級(jí)健康3月齡雄性SD大鼠64只，體質(zhì)量180-220克，分別按購(gòu)買(mǎi)時(shí)間分為立春、春分、立夏、夏至、立秋、秋分、立冬、冬至8個(gè)組（n=8）。分別于節(jié)氣前14天購(gòu)入實(shí)驗(yàn)大鼠。自由攝取水及普通鼠全價(jià)顆粒飼料，室溫飼養(yǎng)，接受自然光照。飼養(yǎng)到相應(yīng)節(jié)氣，于當(dāng)日下午6時(shí)將動(dòng)物斷頭處死，取出大鼠

3、全肺組織進(jìn)行IL-1β、2、6、10和SP-AmRNA檢測(cè)。
　　 結(jié)果：
　　 2.季節(jié)變化對(duì)健康大鼠肺組織IL-1β表達(dá)的影響在正常生理狀態(tài)下，全年健康大鼠肺組織中IL-1βmRNA表達(dá)呈現(xiàn)出夏季較高，春秋冬季較低（立夏>春分>夏至>立春>立冬>冬至>立秋>秋分）的變化趨勢(shì)。半定量PCR結(jié)果顯示春分、立夏、夏至相對(duì)表達(dá)水平，較其他組均有顯著性升高（P<0.05或P<0.01）。秋冬季節(jié)各組間相互比較無(wú)顯著性差異（P>

4、0.05）。
　　 3.季節(jié)變化對(duì)健康大鼠肺組織IL-2表達(dá)的影響在正常生理狀態(tài)下，全年健康大鼠肺組織中IL-2mRNA表達(dá)呈現(xiàn)出春夏季較高，秋冬季較低（春分>夏至>立夏>立春>冬至>立秋>秋分>立冬）的變化趨勢(shì)。半定量PCR結(jié)果顯示與春分、立夏組和夏至組相對(duì)表達(dá)水平比較，其他組明顯降低（P<0.01）。秋冬季節(jié)各組間相互比較無(wú)顯著性差異（P>0.05）.
　　 4.季節(jié)變化對(duì)健康大鼠肺組織IL-6表達(dá)的影響在正常生理狀

5、態(tài)下，全年健康大鼠肺組織中IL-6mRNA表達(dá)呈現(xiàn)出夏季較高，冬季較低，春秋次之（夏至>立夏>立秋>立春>春分>秋分>立冬>冬至）的變化趨勢(shì)。半定量PCR結(jié)果顯示與立冬和冬至組比較，立春、春分、立夏、夏至和立秋組顯著性升高（P<0.05或P<0.01）；與夏至組比較，春分、秋分、立冬和冬至組顯著性降低（P<0.05或P<0.01）；與立秋組比較，秋分、立冬和冬至組顯著性升高（P<0.05）。
　　 5.季節(jié)變化對(duì)健康大鼠肺組織I

6、L-10表達(dá)的影響在正常生理狀態(tài)下，全年健康大鼠肺組織中IL-10mRNA表達(dá)呈現(xiàn)出夏秋季較高，冬春較低（夏至>秋分>立秋>立冬>立夏>春分>立春>冬至）的變化趨勢(shì)。半定量PCR結(jié)果顯示與夏至組比較，立春組和冬至組顯著性降低（P<0.05）。
　　 6.季節(jié)變化對(duì)健康大鼠肺組織SP-A表達(dá)的影響在正常生理狀態(tài)下，健康大鼠肺組織中SP-AmRNA在春夏季節(jié)明顯增加，秋冬季節(jié)中SP-AmRNA表達(dá)較少（夏至>春分>立夏>立春>立秋>

7、秋分>冬至>立冬）的變化趨勢(shì)。半定量PCR結(jié)果顯示與春分和夏至組比較，立秋、秋分、立冬和冬至組顯著性降低（P<0.05或P<0.01）；與立冬組比較，其他各組均顯著性升高（P<0.05或P<0.01）。
　　 結(jié)論：季節(jié)通過(guò)調(diào)節(jié)大鼠肺組織中IL-1β、2、6、10和SP-A的含量的變化來(lái)影響肺的免疫防御功能，其中IL-1β、2、6、10和SP-A可能是機(jī)體免疫功能季節(jié)性變化的中介物質(zhì)基礎(chǔ)。肺部免疫防御功能大致存在春夏較高，秋冬季

8、低的季節(jié)節(jié)律，這可能是秋冬季節(jié)呼吸系統(tǒng)多發(fā)病的病理生理學(xué)基礎(chǔ)之一。
　　 第二部分：季節(jié)變化對(duì)健康大鼠血清Th1和Th2型細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)作用及肺組織形態(tài)學(xué)的影響目的：本部分研究通過(guò)建立自然環(huán)境下大鼠動(dòng)物模型，旨在通過(guò)觀(guān)察不同季節(jié)氣候條件下大鼠血清中Th1和Th2型細(xì)胞因子（IL-10和INF-γ）含量的變化以及肺組織形態(tài)學(xué)的改變，以期闡釋季節(jié)變化影響呼吸系統(tǒng)中Th1和Th2免疫平衡的調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制，為指導(dǎo)臨床實(shí)踐提供一定的理論

9、依據(jù)。
　　 方法：動(dòng)物分組及標(biāo)本取得同第一部分。組織學(xué)觀(guān)察：動(dòng)物斷頭后，迅速開(kāi)胸取右肺中葉，用4％多聚甲醛固定，脫水、包埋、切片，蘇木精-伊紅HE染色，鏡下觀(guān)察形態(tài)學(xué)改變。IL-10和IFN-γ水平的檢測(cè)：大鼠血清離心后，取上清，采用雙抗體夾心ABC-ELISA法測(cè)定血清中的IFN-γ水平，放射免疫分析法檢測(cè)IL-10水平。
　　 結(jié)果：
　　 1.季節(jié)變化對(duì)健康大鼠肺組織形態(tài)學(xué)的影響春夏秋季組：大鼠肺組織支氣

10、管內(nèi)及周?chē)Y(jié)構(gòu)連續(xù)，無(wú)明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，組織黏膜未見(jiàn)充血水腫滲出及肺泡間隔狹窄，肺泡腔清亮寬敞無(wú)擴(kuò)大。立冬組和冬至組：可見(jiàn)肺泡腔變窄，肺泡間隔變大，無(wú)明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)以及黏膜充血水腫。
　　 2.季節(jié)變化對(duì)正常大鼠血清Th1型細(xì)胞因子IFN-γ含量的影響在正常生理狀態(tài)下，全年健康SD大鼠血清中IFN-γ呈現(xiàn)出冬季較低，其他季節(jié)較高（立夏>春分>立春>立秋>秋分>夏至>冬至>立冬）的變化趨勢(shì)。與立冬組和冬至組比較，其他各組均顯著性

11、升高（P<0.05或P<0.01）；立夏組較夏至組、立秋組、秋分組、立冬組和冬至組均顯著性升高（P<0.05或P<0.01）；春分組較夏至組、秋分組、立冬組和冬至組均顯著性升高（P<0.05或P<0.01）。
　　 3.季節(jié)變化對(duì)正常大鼠血清Th2型細(xì)胞因子IL-10含量的影響在正常生理狀態(tài)下，全年健康SD大鼠血清中IL-10呈現(xiàn)出夏季較高，其他季節(jié)較低（立夏>夏至>立冬>立春>冬至>立秋>春分>秋分）的變化趨勢(shì)。與秋分組比較，

12、其他各組顯著性升高（P<0.05或P<0.01）。春夏冬季節(jié)間比較無(wú)顯著性差異（P>0.05）。
　　 結(jié)論：季節(jié)變化過(guò)程中大鼠血清中IFN-γ和IL-10的含量發(fā)生了季節(jié)性變化，季節(jié)通過(guò)調(diào)節(jié)它們的含量來(lái)影響機(jī)體Th1/Th2免疫平衡。冬季機(jī)體可能通過(guò)降低IFN-γ含量，升高IL-10含量，降低呼吸系統(tǒng)免疫功能，導(dǎo)致多種呼吸系統(tǒng)疾病疾病的發(fā)生。
　　 第三部分：季節(jié)變化對(duì)健康人外周血CD3+、CD4+、CD8+和CD56

13、+淋巴細(xì)胞比率的影響目的：通過(guò)在季節(jié)不同時(shí)點(diǎn)對(duì)健康人外周血CD3+、CD4+、CD86和CD56+淋巴細(xì)胞的檢測(cè)，探討季節(jié)變化對(duì)人體免疫功能的影響，為“天人相應(yīng)”理論應(yīng)用于臨床呼吸系統(tǒng)疾病的防治提供確切的客觀(guān)指標(biāo)。
　　 方法：選取我校2007級(jí)新入學(xué)的學(xué)生志愿者20名，男女各10例，均經(jīng)我校附屬醫(yī)院體檢合格，無(wú)各種感染、無(wú)急慢性口腔鼻咽疾病、腫瘤、免疫系統(tǒng)疾病或肝腎功能不全等病史，且在實(shí)驗(yàn)期間內(nèi)未使用抗生素、非甾體類(lèi)消炎藥及影

14、響免疫系統(tǒng)功能的藥物。分別于8個(gè)節(jié)氣不同實(shí)驗(yàn)日前7天充分休息且處于室內(nèi)外自然環(huán)境狀態(tài)下，于實(shí)驗(yàn)日下午在安靜空腹?fàn)顟B(tài)下抽取2mL外周血。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)外周血中CD3+、CD4+、CD8+、CD56+淋巴細(xì)胞進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.季節(jié)變化對(duì)健康人外周血CD3+淋巴細(xì)胞數(shù)量的影響全年健康人外周血中CD3+T淋巴細(xì)胞比率呈現(xiàn)出夏季較高，冬季較低，春秋季節(jié)次之（夏至>立夏>立秋>立春>春分>秋分>立冬>冬至）的變化

15、趨勢(shì)。與立夏組和夏至組比較，立冬組和冬至組CD3+T淋巴細(xì)胞比率均顯著性下降（P<0.01）。
　　 2.季節(jié)變化對(duì)健康人外周血CD56+淋巴細(xì)胞數(shù)量的影響全年健康人外周血中CD56+自然殺傷淋巴細(xì)胞比率呈現(xiàn)出夏季較高，春秋冬季節(jié)較低（立夏>夏至>春分>立冬>立秋>立春>秋分>冬至）的變化趨勢(shì)。各季節(jié)組未見(jiàn)顯著性差異（P>0.05）。
　　 3.季節(jié)變化對(duì)健康人外周血CD4+T淋巴細(xì)胞比率的影響全年健康人外周血中CD4+

16、T淋巴細(xì)胞比率呈現(xiàn)出夏季較高，冬季較低，春秋季節(jié)次之（夏至>立夏>春分>立春>立秋>秋分>冬至>立冬）的變化趨勢(shì)。與立夏組和夏至組比較，立冬組和冬至組CD4+T細(xì)胞均顯著性下降（P<0.05）。
　　 4.季節(jié)變化對(duì)健康人外周血CD8+T淋巴細(xì)胞比率的影響全年健康人外周血中CD8+T淋巴細(xì)胞比率呈現(xiàn)出冬季較高，夏季較低，春秋季節(jié)次之（冬至>立秋>立春>立冬>秋分>春分>立夏>夏至）的變化趨勢(shì)。與夏至組比較，冬至組CB8+T細(xì)胞比

17、率均顯著性上升（P<0.05）。
　　 5.季節(jié)變化對(duì)健康人外周血CD4+/CD8+T細(xì)胞比值的影響全年健康人外周血中CD4+/CD8+T細(xì)胞比值呈現(xiàn)出夏季較高，冬季較低，春秋季節(jié)次之（夏至>立夏>春分>立春>立秋>秋分>立冬>冬至）的變化趨勢(shì)。與立夏組比較，冬至組CD4+/CD8+比值顯著性下降（P<0.05）；與夏至組比較，立秋組、秋分組、立冬組和冬至組CD4+/CD8+比值顯著性下降（P<0.05或P<0.01）。