重組靈芝免疫調(diào)節(jié)蛋白(rLZ-8)免疫調(diào)節(jié)及抗癌機制初步研究.pdf

1、Ling Zhi-8（LZ-8）是一種從靈芝（Ganoderma lucidium）菌絲體中提取出的真菌免疫調(diào)節(jié)蛋白。LZ-8具有免疫調(diào)節(jié)活性，可以促進人外周血淋巴細胞和人外周血單個核細胞以及小鼠脾細胞的增殖，誘導分泌白細胞介素，腫瘤壞死因子和干擾素等細胞因子，以及調(diào)節(jié)免疫活性細胞黏附分子的表達，并且LZ-8具有抗腫瘤活性。目前其作用機制尚未完全清楚。
　　 本文通過畢赤酵母（Pichia pastoris）表達系統(tǒng)來表達重組靈

2、芝免疫調(diào)節(jié)蛋白（rLz-8），經(jīng)過純化的rLZ-8用綿羊紅細胞凝血實驗以及小鼠脾淋巴細胞增殖實驗來檢測其生理活性，得到了高純度并且具有穩(wěn)定生理活性的rLZ-8樣品。用異硫氰酸熒光素（FITC）對rLZ-8進行熒光標記，將標記后的FITC-rLZ-8分別與人外周血淋巴細胞（HPBL），小鼠脾細胞，293T細胞，A549細胞進行共培養(yǎng)，利用激光共聚焦顯微鏡觀察rLZ-8在這些細胞中的亞細胞定位，結(jié)果發(fā)現(xiàn)rLZ-8在有些HPBL的細胞膜上富集

3、，而在有些HPBL細胞的內(nèi)部富集，僅在小鼠脾細胞的細胞膜上分布，僅在293T與A549細胞內(nèi)部分布，說明rLZ-8與不同細胞的作用方式和作用位點有所不同。
　　 利用MTT法測定rLZ-8對A549細胞增殖的影響，結(jié)果顯示rLZ-8能夠抑制A549細胞的增殖并且與rLZ-8的劑量和作用時間呈正相關。進一步對與rLZ-8共培養(yǎng)的A549細胞進行衰老相關的[β]-半乳糖苷酶（SA-[β]-Gal）染色實驗，結(jié)果表明與rLZ-8共培養(yǎng)

4、的A549細胞表現(xiàn)出早熟衰老的特征，說明rLZ-8可能通過誘導A549細胞的早熟衰老來抑制其增殖。
　　 本文表達和純化了rLZ-8，得到了高純度并且具有穩(wěn)定生物活性的rLZ-8樣品，為大規(guī)模獲得rLZ-8從而進一步研究LZ-8的功能和作用機制以及在臨床上的應用奠定了基礎。并且利用FITC熒光標記技術對rLZ-8在幾種細胞中的亞細胞定位做了初步的探索，同時發(fā)現(xiàn)rLZ-8對人類肺癌細胞A549的增殖有抑制作用，其原因可能是由于rL