四種鹀遺傳多樣性及親緣關(guān)系的AFLP分析.pdf

1、擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性(AFLP)的檢測(cè)原理是基于對(duì)基因組進(jìn)行限制性酶切和選擇性擴(kuò)增所產(chǎn)生的DNA片段多態(tài)性。AFLP技術(shù)結(jié)合了RFLP技術(shù)的穩(wěn)定可靠性和RAPD技術(shù)的簡(jiǎn)便高效性，多態(tài)性檢出率高。AFLP分析包括以下三個(gè)步驟：(i)基因組DNA的限制性內(nèi)切酶消化和接頭的連接；(ii)限制性片段的擴(kuò)增；(iii)擴(kuò)增產(chǎn)物的分離與檢測(cè)。用這種方法，可以在不知道基因組序列信息的情況下獲得直觀的限制性酶切序列信息。這種方法可以使兩種特異的限制性內(nèi)切

2、酶同時(shí)使用。酶切序列可以同時(shí)被檢測(cè)出來(lái)，但檢測(cè)效果取決于所采用的檢測(cè)方法。一般一次PCR在聚丙烯酰胺凝膠電泳下可以檢測(cè)出50～100條帶。因此，非常適于遺傳多樣性分析、遺傳作圖、親緣關(guān)系鑒定和分子標(biāo)記研究。 鹀屬隸屬于雀形目鹀科，全世界共有38種，主要分布于歐洲、亞洲及北非，其中分布在中國(guó)境內(nèi)的有26種，東北分布有18種。 早期鳥(niǎo)類分類和系統(tǒng)發(fā)育主要集中在外部形態(tài)及內(nèi)部解剖學(xué)特征等宏觀領(lǐng)域的研究上。隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)外

3、形較接近的類群，僅用形態(tài)學(xué)性狀無(wú)法確定其系統(tǒng)關(guān)系，此時(shí)蛋白質(zhì)和核酸分子結(jié)構(gòu)檢測(cè)方法被應(yīng)用于分類研究中，由于近幾年分子標(biāo)記技術(shù)的出現(xiàn)使分類研究又有了新的發(fā)展。 由于AFLP技術(shù)比較復(fù)雜，對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的要求較高，國(guó)內(nèi)迄今未有對(duì)鹀屬鳥(niǎo)類的AFLP研究報(bào)道，但對(duì)該鳥(niǎo)的核型及數(shù)量細(xì)胞分類研究已有一些報(bào)道。本研究首先在參考相關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，對(duì)鹀屬基因組AFLP指紋圖譜構(gòu)建的各項(xiàng)條件進(jìn)行了優(yōu)化，并建立了穩(wěn)定的低成本的銀染AFLP分析體系。其次選

4、擇11對(duì)選擇性擴(kuò)增引物進(jìn)行擴(kuò)增效果和多態(tài)性分析，尋找適宜鹀屬鳥(niǎo)類基因組分析的AFLP引物。 最后對(duì)四種鹀(三道眉草鹀2只；灰頭鹀5只；白頭鹀5只；白眉鹀6只)進(jìn)行了AFLP多態(tài)性及親緣關(guān)系分析，探討AFLP應(yīng)用于鹀屬鳥(niǎo)類親緣關(guān)系分析中的可行性，取得的主要結(jié)果如下： 1.對(duì)39對(duì)引物組合進(jìn)行了篩選，其中11對(duì)具有較好的多態(tài)性。共得到535個(gè)標(biāo)記位點(diǎn)，其中429個(gè)為多態(tài)位點(diǎn)，多態(tài)位點(diǎn)比率達(dá)80.1％。 2.根據(jù)Jac