茉莉花遺傳多樣性及親緣關(guān)系的ISSR分析.pdf

1、茉莉花(Jasminum sambac(L.)Atiton)木樨科素馨屬多年生灌木，起源于波斯灣一帶，種質(zhì)資源十分豐富。但長(zhǎng)期以來(lái)，對(duì)茉莉花資源的分類和利用，都是采用林奈和恩格勒的形態(tài)特征分類法，往往有些種、品種和品系在外貌和形態(tài)特征上十分相似，但親緣關(guān)系和遺傳特性卻相差巨大，使得茉莉花的分類地位及親緣關(guān)系一直存在著較多的爭(zhēng)議，并給茉莉花的新品種培育和資源利用帶來(lái)困難。本試驗(yàn)以廣西區(qū)域內(nèi)廣泛收集的茉莉花品種為試材，應(yīng)用ISSR分子標(biāo)記技

2、術(shù)，探討茉莉花的分類和品種之間親緣關(guān)系的研究。試驗(yàn)結(jié)果表明： 1、通過(guò)對(duì)SDS、CTAB和改良CTAB法三種基因組DNA提取方法的比較，從純度、產(chǎn)率等方面考慮，認(rèn)為改良CTAB法較為適合茉莉花基因組DNA的提取。采用該方法提取的茉莉花基因組DNA，經(jīng)電泳檢測(cè)，主帶清晰，無(wú)降解，分光光度計(jì)檢測(cè)，A260/A280的值在1.81-1.84之間，符合PCR反應(yīng)的要求。 2、通過(guò)對(duì)Taq DNA聚合酶、dNTP、模板DNA、Pr

3、imer不同濃度的優(yōu)化試驗(yàn)及對(duì)PCR反應(yīng)程序的篩選，確定了合適的反應(yīng)體系和反應(yīng)程序，從而建立了茉莉花的ISSR分析技術(shù)體系。在20μl反應(yīng)體系中，模板DNA 75ng，Primer 5 μmol，rTaq polymerase l U，dNTP 4 mmol，buffer(含Mg2+)2ul。反應(yīng)程序?yàn)椋侯A(yù)變性，94℃5min；變性，94℃1min；退火，X℃1min；延伸，72℃2min；40個(gè)循環(huán)，72℃延伸10min，4℃保存。

4、 3、利用篩選得到的10條ISSR引物對(duì)全部茉莉花材料進(jìn)行PCR擴(kuò)增，30份扦插苗得到70個(gè)位點(diǎn)，其中多態(tài)性位點(diǎn)數(shù)為34個(gè)，多態(tài)位點(diǎn)百分率為48.57％；擴(kuò)增135份實(shí)生苗得到70個(gè)位點(diǎn)，其中多態(tài)性位點(diǎn)數(shù)為42個(gè)，多態(tài)位點(diǎn)百分率為60％；擴(kuò)增24份實(shí)生苗得到66個(gè)位點(diǎn)，其中多態(tài)性位點(diǎn)數(shù)為44個(gè)，多態(tài)位點(diǎn)百分率為65.7％。擴(kuò)增片段長(zhǎng)度分布在100bp-2000bp之間，平均每個(gè)引物能擴(kuò)出7條帶。 4、運(yùn)用NTSYS軟件，采

5、用Dice相似系數(shù)分析ISSR反應(yīng)結(jié)果，得到了24個(gè)品種間的親緣關(guān)系樹(shù)狀圖。以0.77作為相似系數(shù)的分界點(diǎn)，24個(gè)實(shí)生苗樣品通過(guò)基因組ISSR分成2大類：花蕾較多的為一類，另一類在相似系數(shù)0.84的水平將其余的23個(gè)茉莉花材料分為4個(gè)品種群：群Ⅰ：葉型基本相同的；群Ⅱ：分枝少，花期晚；群Ⅲ：無(wú)分枝，花期晚；群Ⅳ：無(wú)分枝，花蕾少。該結(jié)果與傳統(tǒng)的分類結(jié)論基本一致。 5、利用ISSR技術(shù)可以對(duì)基因組的所有序列直接分析，不受環(huán)境的影響，