非小細胞肺癌的表現(xiàn)遺傳學(xué)治療對DNMT1表達的影響.pdf

1、目的:探討表觀治療對非小細胞肺癌(NSCLC)DNMT1表達的影響特點及生物學(xué)作用。
　　方法:本研究分為兩部分。第一部分:表觀治療對NSCLC中DNMT1的影響及作用機制的研究:1.表觀治療對NSCLC中DNMT1表達的影響。非小細胞肺癌細胞分為對照組（未用藥）、5-AZA-CDR治療組（1～3天）、MS-275治療組（第4天）及混合治療組(第1～3天，5-AZA-CDR;第4天，MS-275)，治療后收集細胞，提取蛋白通過We

2、sternblotting技術(shù)對DNMT1表達進行分析;2.表觀治療抑制DNMT1表達的作用機制，按照第一部分治療方案收集細胞樣本，提取總RNA，進行逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，然后進行qRT-PCR分析。
　　第二部分:表觀治療的用藥濃度及治療后非小細胞肺癌細胞中DNMT1變化的研究。1.表觀治療藥物治療NSCLC的最佳用藥濃度的探究:對非小細胞肺癌細胞分為對照組（未用藥）、5-AZA-CDR治療組（1～3天）、MS-275治療組（第4

3、天）及混合治療組(第1～3天，5-AZA-CDR;第4天，MS-275)，加入不同濃度的藥物，通過MTT及Westernblotting技術(shù)探索治療非小細胞肺癌細胞的最佳用藥濃度;2.表觀治療結(jié)束后非小細胞肺癌細胞中DNMT1表達的變化。表觀治療后，收集停藥后不同時間段的非小細胞肺癌細胞，進行Westernblotting分析，來檢測停藥后DNMT1在非小細胞肺癌細胞中表達的變化。
　　結(jié)果:第一部分:1.表觀治療后，治療組DNM

4、T1表達水平均低于未治療組，聯(lián)合治療組較5-AZA-CDR治療組有效，而5-AZA-CDR治療組比MS-275治療組效果明顯;2.通過qRT-PCR研究證明了DNMT1生成減少是其在細胞中表達降低的主要原因。
　　第二部分研究發(fā)現(xiàn)，表觀治療藥物如果藥物濃度過小對DNMT1抑制效果不明顯，若用量過大則會產(chǎn)生細胞毒性;表觀治療結(jié)束時對非小細胞肺癌細胞中DNMT1的抑制作用最強，但隨著停藥時間的延長，DNMT1表達水平有所恢復(fù);而且不同

5、細胞株對表觀治療的敏感性不同。
　　結(jié)論
　　1.表觀治療能有效抑制NSCLC中DNMT1基因的表達，而且對NSCLC生長有抑制作用，并能誘導(dǎo)其死亡。DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-AZA-CDR對DNMT1的抑制作用較去乙?；敢种苿㎝S-275直接有效，聯(lián)合用藥效果更佳。表觀藥物對DNMT1的抑制作用主要體現(xiàn)在阻礙其生成。
　　2.表觀治療藥物如果藥物濃度過小對抑制DNMT1效果不明顯，若用量過大則會產(chǎn)生細胞毒性，而且