基于生物分子網(wǎng)絡(luò)的中藥木賊藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究.pdf

1、采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，分別對(duì)中藥木賊提取液、木賊給藥后大鼠血清，咖啡酸給藥后血清、阿魏酸給藥后血清、槲皮素給藥后血清進(jìn)行全譜掃描分析，考察了空白組與給藥組大鼠的內(nèi)源性代謝物的差異以及給藥后不同時(shí)間點(diǎn)內(nèi)源性代謝物質(zhì)的變化，獲得了中藥木賊的化學(xué)成分、大鼠血清的內(nèi)源性成分以及分析了給藥后大鼠體內(nèi)差異性代謝物的變化規(guī)律。對(duì)潛在生物標(biāo)記物的質(zhì)譜解析，通過(guò)二級(jí)碎片比對(duì)在線數(shù)據(jù)庫(kù)，確證化合物的結(jié)構(gòu)，同時(shí)通過(guò)生物效應(yīng)網(wǎng)絡(luò)并結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)闡明藥物

2、在體內(nèi)的作用機(jī)制。本研究的內(nèi)容如下：
　　1．運(yùn)用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（HPLC- MS）分析中藥木賊的主要化學(xué)成分。木賊以75％乙醇為提取溶劑，回流提取2 h，過(guò)濾，減壓濃縮，蒸餾水定容，稀釋后進(jìn)樣40μL。采用Agilent EC-C18色譜柱（4.6 mm×100 mm，2.7μm），以乙腈( A)~0.1%甲酸水溶液(B)，梯度洗脫(初始5%A，95%B;10 min，10%A，90%B;15min，15%A，85%

3、B；19min，21%A，79%B；60 min，100%A，0%B;)；流速：0.6 mL·min?1;柱溫：25℃；進(jìn)樣量：40μL。以電噴霧離子阱質(zhì)譜儀為檢測(cè)器。獲得了中藥木賊提取物的一級(jí)總離子流圖及二級(jí)質(zhì)譜圖，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)品鑒定了咖啡酸、阿魏酸、槲皮素、對(duì)羥基苯甲酸4種化學(xué)成分。
　　2．一次性灌胃Wistar大鼠木賊提取液，考察空白組與給藥組大鼠血清中內(nèi)源性代謝物的差異，利用非監(jiān)督的主成分分析（PCA）法并不能將兩組很好的區(qū)

4、分，進(jìn)一步采用有監(jiān)督的偏最小二乘判別分析(PLS-DA)法進(jìn)行分析，通過(guò)得分圖可知空白組和給藥組有顯著的代謝差異，說(shuō)明基于高效液相色譜-質(zhì)譜分析的血清代謝組學(xué)研究可以對(duì)內(nèi)源性代謝物進(jìn)行分析。根據(jù)VIP值并結(jié)合t檢驗(yàn)，篩選出對(duì)分組貢獻(xiàn)較大的幾種潛在生物標(biāo)記物，通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)鑒定出5種化合物，進(jìn)一步分析其在體內(nèi)的動(dòng)態(tài)變化，根據(jù)生物效應(yīng)網(wǎng)絡(luò)并結(jié)合文獻(xiàn)，闡明木賊的生物效應(yīng)機(jī)制。
　　3.分別對(duì)Wistar大鼠一次性灌胃咖啡酸、阿魏酸、槲皮素，