海洋中藥尖海龍化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)研究.pdf

1、生藥海龍為海龍科動物尖海龍、擬海龍、刁海龍的干燥體（《中國藥典》），其中尖海龍Syngnathus acus Linn在分類學(xué)上屬脊索動物門（Chordata）、硬骨魚綱（Osteichthyes）、海龍目（Thalattosauria）、海龍科（Syngnathidae）魚類，廣泛分布于我國沿海地區(qū)。尖海龍的產(chǎn)地和性狀均在《中國藥典》進(jìn)行了詳細(xì)描述。20世紀(jì)80年代尖海龍的化學(xué)成分已經(jīng)開始研究。采用GC-MS手段對尖海龍進(jìn)行了組分鑒定

2、，檢測出其主要化學(xué)成分為甾體類以及脂肪酸類，DHA+EPA含量占到31％。在20世紀(jì)90年代，首次對尖海龍進(jìn)行分離提取工作，從中分離純化得到18個化合物，包括甾體化合物11個，脂肪酸3個，高級醇1個，酯類化合物和大黃酚等;尖海龍表現(xiàn)出了良好的延緩衰老、抗癌、抗疲勞、性激素樣作用、增強(qiáng)免疫力、加強(qiáng)心肌細(xì)胞收縮力、治療痹癥，降低膽固醇等作用，表明尖海龍化學(xué)成分多樣化，具有潛在的藥用價值。已有研究對尖海龍研究大部分集中在生藥形態(tài)鑒別、化學(xué)成分

3、以及粗提物的藥理活性等方面，但其指標(biāo)成分以及有效成分尚不明確，鮮有尖海龍化學(xué)成分含量測定方法的報道。
　　尖海龍Syngnathus acus Linn在我國又名錢串子、小海龍或楊枝魚，主要分布在我國沿海地區(qū)，且資源豐富，尤其盛產(chǎn)于海南、山東、浙江等地。本課題組前期已經(jīng)對尖海龍做了系統(tǒng)的定性研究，完成了TLC鑒別以及通識項檢查，為新版《中國藥典》海龍部分提供了完整的鑒別項及檢查項研究資料。為全面控制尖海龍質(zhì)量，本課題組于2014年

4、2月份在山東省青島市靈山島收集了大量尖海龍，根據(jù)中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究技術(shù)指導(dǎo)規(guī)范，通過TLC化學(xué)追蹤，對尖海龍進(jìn)行更加細(xì)致的化學(xué)成分研究，旨在分離純化得到尖海龍指標(biāo)性及有效性成分，為完善尖海龍質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系奠定基礎(chǔ)，對鑒別尖海龍真?zhèn)我约百|(zhì)量好壞有重要意義。以凝膠柱色譜LH-20、薄層色譜TLC、ODS柱色譜、硅膠柱色譜以及高效液相色譜HPLC等方法對尖海龍Syngnathus acus Linn的甲醇提取物進(jìn)行分離，借助核磁共振譜、質(zhì)譜等手段

5、并結(jié)合了其理化性質(zhì)確定14個化合物結(jié)構(gòu)?；衔锓謩e為:3β-Hydroxycholest-5-en-7-one(1)，膽甾-5-烯-3β，7α-二醇(2)，膽甾-5-烯-3β，7β-二醇(3)，Cholesterol(4)，十六烷酸單甘油酯(5)，2,2-oxybis(1,4-di-tert-butylbenzene)(6)，Phenylacetate(7),1-methylhydantoin(8),cyclo-(Ala-Pro)(9)

6、，2-piperidone(10)，尿嘧啶(11)，Hypoxanthine(12)，胸腺嘧啶(13)，2'-脫氧胸腺嘧啶核苷(14)。結(jié)合前期研究結(jié)果，化合物(4)為尖海龍主要成分，化合物(1)、(2)和(3)可作為尖海龍指標(biāo)性成分。
　　生物活性研究:選擇K562（人紅白血病細(xì)胞）、Hela（人宮頸癌細(xì)胞）、A549（人肺腺癌細(xì)胞）和HCT-116四種腫瘤細(xì)胞株，以阿霉素為陽性對照，采用MTT法或SRB法對6種單體化合物的體外