重組人p53腺病毒PLGA緩釋微球磷酸鈣骨水泥復(fù)合物抑癌作用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn).pdf

1、目的：研究重組人 p53腺病毒 PLGA緩釋微球磷酸鈣骨水泥復(fù)合物的抗腫瘤性能，探討制作新型載生物制劑抗腫瘤骨填充材料的可能性。
　　磷酸鈣骨水泥（CPC）不僅可以在體內(nèi)吸收降解，被再生骨組織替代，而且還有良好的生物相容性和骨傳導(dǎo)性，能夠自行固化的骨填充物。還有它不像PMMA聚合固化時(shí)產(chǎn)生高熱，且水泥粉末之間有相當(dāng)?shù)目臻g所以能成為良好的藥物載體。常將 CPC作為多肽類、有生物活性藥物的載體。將抗腫瘤藥物載入磷酸鈣骨水泥，既能修復(fù)骨

2、缺損同時(shí)又能殺滅殘存的腫瘤細(xì)胞，主要用于骨腫瘤切除術(shù)后缺損充填，是近年來骨充填材料的研究熱點(diǎn)之一。
　　p53基因是得到醫(yī)學(xué)認(rèn)可的抑制腫瘤基因之一，在人類百余種腫瘤中，有六成以上的發(fā)生與該基因的突變有關(guān)。重組人p53腺病毒由人基因p53與腺病毒（5型）充當(dāng)載體重組而成的基因治療腫瘤的藥品，它有很高的安全性，還有很高的轉(zhuǎn)染率等優(yōu)點(diǎn)。它是一種廣譜抗癌制品，能明顯抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，特異性地引起腫瘤細(xì)胞凋亡，而正常細(xì)胞則無損傷。重組人p

3、53腺病毒可以使機(jī)體受到刺激而發(fā)生抗腫瘤特異性的免疫變態(tài)反應(yīng)，腫瘤組織局部用藥后，能聚集腫瘤相關(guān)的殺傷性細(xì)胞在腫瘤組織周邊，從而使腫瘤組織被滅亡。
　　本研究旨在探討復(fù)合具有抗腫瘤活性的骨充填材料即重組人 p53腺病毒－CPC抗腫瘤復(fù)合骨水泥的方法，以獲得有一定承載強(qiáng)度的抗腫瘤復(fù)合骨充填材料。合成聚乳酸－乙醇酸共聚物(PLGA)包埋重組人 p53腺病毒的緩釋微球，并將緩釋顆粒以一定的百分比與磷酸鈣骨水泥（Calcium Phosp

4、hate Cement，CPC）混合，這樣就得到了一種全新的抗腫瘤骨水泥。研究其中抗腫瘤基因藥物的體外釋放、活性、抗腫瘤效應(yīng)?？鼓[瘤復(fù)合人工骨水泥的體外試驗(yàn)、動(dòng)物試驗(yàn)，探討其對(duì)腫瘤增長(zhǎng)抑制。
　　方法：本實(shí)驗(yàn)共三步：第一步運(yùn)用乳化溶劑揮發(fā)法（w/o/o）制備重組人p53腺病毒 PLGA緩釋微球，制備出后在光學(xué)顯微鏡下觀察其形態(tài)；第二步將重組人p53腺病毒PLGA緩釋微球以8％的質(zhì)量百分比與磷酸鈣骨水泥復(fù)合，觀察復(fù)合后其形態(tài)，并體外

5、測(cè)定重組人 p53腺病毒 PLGA緩釋微球磷酸鈣骨水泥復(fù)合物中抑癌基因藥物緩釋情況；第三步荷瘤裸鼠模型將植入重組人 p53腺病毒PLGA緩釋微球磷酸鈣骨水泥復(fù)合物，觀察腫瘤生長(zhǎng)情況，并進(jìn)行對(duì)比參照實(shí)驗(yàn)，數(shù)據(jù)分析，以確定重組人 p53腺病毒 PLGA緩釋微球磷酸鈣骨水泥復(fù)合物是否對(duì)腫瘤有抑制治療作用。
　　結(jié)果：1、運(yùn)用乳化溶劑揮發(fā)法，以聚乳酸－乙醇酸共聚物（PLGA）為載體，制備出重組人p53腺病毒PLGA緩釋微球，微球無明顯粘連

6、、呈規(guī)則球形，表面光滑，大小分布均勻。制作過程方法簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，可控性好。用該法制備的PLGA包裹的緩釋微球在突釋期釋放藥物較少，但是釋放速度較快，穩(wěn)定期釋放藥物長(zhǎng)期穩(wěn)定，主要是 PLGA不斷被分解吸收，藥物不斷釋放出，時(shí)間可長(zhǎng)達(dá)12天以上。
　　2、載體為磷酸鈣骨水泥的緩釋系統(tǒng)在藥物緩慢釋放的過程中，局部的藥物濃度可以長(zhǎng)期穩(wěn)定存在。重組人 p53腺病毒 PLGA緩釋微球磷酸鈣骨水泥復(fù)合物能夠緩慢釋放重組人p53腺病毒12天之久

7、，前期突放量小。磷酸鈣骨水泥與PLGA包埋重組人 p53腺病毒的緩釋微球復(fù)合物所產(chǎn)生的緩釋液可有效抑制胃癌細(xì)胞的增殖，具有很好的抑制腫瘤生長(zhǎng)的生物活性。
　　3、重組人p53腺病毒PLGA緩釋微球磷酸鈣骨水泥復(fù)合物使荷瘤裸鼠體內(nèi)的胃癌細(xì)胞大片壞死，可有效的抑制腫瘤的增殖。重組人p53腺病毒將來有希望是腫瘤治療舉足輕重的一員。重組人 p53腺病毒 PLGA緩釋微球磷酸鈣骨水泥復(fù)合物不僅可以填補(bǔ)骨缺損，而且可以釋放藥物起局部抗腫瘤作用

8、，是一種全新的骨填充材料。可望成為骨腫瘤切除后良好的骨填充物或椎體轉(zhuǎn)移性腫瘤經(jīng)皮椎體成形強(qiáng)化的新型材料。
　　結(jié)論：采用可降解的聚合物 PLGA作為藥物載體材料，制備重組人 p53腺病毒PLGA緩釋微球，工藝簡(jiǎn)便易行，穩(wěn)定性好；重組人p53腺病毒能夠從PLGA包埋微球中持續(xù)穩(wěn)定的釋放；重組人 p53腺病毒 PLGA緩釋微球與磷酸鈣骨水泥復(fù)合物(rAd-p53-PLGA-CPC)可提供理想的藥物緩釋作用；該復(fù)合物緩釋液可在體外有效抑

9、制胃癌細(xì)胞的增殖；rAd-p53-PLGA-CPC復(fù)合物在祼鼠體內(nèi)可抑制胃癌移植瘤的生長(zhǎng)、侵襲。本實(shí)驗(yàn)制備的rAd-p53-PLGA-CPC復(fù)合物集骨修復(fù)和抗腫瘤藥物于一體，為骨腫瘤術(shù)后骨缺損或椎體轉(zhuǎn)移性椎體腫瘤經(jīng)皮微創(chuàng)椎體強(qiáng)化治療提供了新思路，有望成為一種新型的具有抗腫瘤作用的骨充填材料。
　　本研究新思路：首次率先合成重組人p53腺病毒（基因藥物）PLGA緩釋微球磷酸鈣骨水泥復(fù)合物，其不僅起到腫瘤術(shù)后的骨缺損的填充作用，而且同