紅龍草的組織培養(yǎng)及發(fā)根農(nóng)桿菌對(duì)紅龍草的遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、該文研究了紅龍草(Altemanthera Ficoidea cv."Ruliginosa")葉片的組織培養(yǎng)、發(fā)根農(nóng)桿菌(Agrobacterium rhizogenes)ATCC 15834對(duì)紅龍草的遺傳轉(zhuǎn)化以及毛狀根液體培養(yǎng)過程中培養(yǎng)液某些營(yíng)養(yǎng)成分的消耗變化.結(jié)果如下:紅龍草葉片外植體在MS+6-BA1.0mg/L+4-PU 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L的培養(yǎng)基上形成淺綠色愈傷組織,20d后愈傷組織誘導(dǎo)率達(dá)100％.而在添

2、加6-BA1.0mg/L和NAA0.4mg/L的MS培養(yǎng)基中,約45.31％的愈傷組織分化出不定芽.不定芽在1/2MS+NAA0.4mg/L的培養(yǎng)基上可全部生根,長(zhǎng)成完整植株.紅龍草葉片外植體被發(fā)根農(nóng)桿菌ATCC 15834感染8d后,從形態(tài)學(xué)下端葉脈處陸續(xù)分化出乳白色的不定根,21d后,葉片外植體的生根率高達(dá)92.5％.其中轉(zhuǎn)化毛狀根的頻率為53.8％,毛狀根呈密集叢生狀、多分枝,被大量白色細(xì)絨毛.紅龍草毛狀根能在無激素的固體或液體培

3、養(yǎng)基上快速自主生長(zhǎng).PCR擴(kuò)增結(jié)果證實(shí),Ri質(zhì)粒的T-DNA部分已在紅龍草毛狀根的基因組中整合及表達(dá).紅龍草毛狀根在MS+6-BA 2.0mg/L+4-PU2.0 mg/L+NAA0.5 mg/L的培養(yǎng)基上形成愈傷組織,其愈傷組織誘導(dǎo)率達(dá)68.75％.而在添加6-BA2.0mg/L和NAA0.8mg/L的MS培養(yǎng)基上,部分愈傷組織能分化出幼芽.紅龍草毛狀根液體培養(yǎng)的生長(zhǎng)過程分為三個(gè)時(shí)期:生長(zhǎng)遲滯期、快速生長(zhǎng)期、生長(zhǎng)平臺(tái)期.對(duì)毛狀根液體培

4、養(yǎng)過程中培養(yǎng)基內(nèi)蔗糖、硝態(tài)氮、氨態(tài)氮以及磷酸鹽含量的分析結(jié)果表明:培養(yǎng)基中蔗糖的消耗速率與毛狀根的生長(zhǎng)曲線呈正相關(guān).在毛狀根生長(zhǎng)遲滯期內(nèi),培養(yǎng)基中的硝態(tài)氮和磷酸鹽的消耗較快,其消耗速率分別為16.71μg/ml·d和1.67μg/ml·d;但在快速生長(zhǎng)期,其消耗速率反而減慢.而在生長(zhǎng)遲滯期內(nèi),培養(yǎng)液中氨態(tài)氮的消耗高達(dá)35.29μg/ml·d,但進(jìn)入快速生長(zhǎng)期后,氨態(tài)氮含量先明顯回升,然后又逐漸下降.培養(yǎng)基的pH值隨毛狀根培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而