點帶石斑魚病毒性神經壞死病研究.pdf

1、病毒性神經壞死病(Viral nervous necrosis disease，VNN disease)為近年來我國沿海石斑魚養(yǎng)殖廠上極為嚴重的疾病，其致病原為神經壞死病毒(NervousNecrosis Virus)，此病毒感染易造成石斑魚及幼魚的大量死亡，死亡率往往高達90％，造成我國石斑魚養(yǎng)殖業(yè)極大的損失。該病毒為兩條單股RNA，分別為RNA1和RNA2，其中RNA1的功能為RNA-dependent RNA polymerase

2、(RdRp)，RNA2則可以轉錄翻譯出病毒的外殼蛋白。 本研究中，應用實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈式反應(RRT-PCR)等實驗方法，對近年來福建南部地區(qū)海水養(yǎng)殖點帶石斑魚暴發(fā)性的傳染病進行調查和研究。闡明了該地區(qū)養(yǎng)殖石斑魚傳染病的主要種類及其流行病學特征。病毒性神經壞死病是該地區(qū)最常見、危害也最大的傳染病。該傳染病具有典型的神經癥狀，游動異常，中樞神經和視網膜組織出現空泡壞死病變。病魚除了神經異常外，無其它臨床癥狀，體表及體內也

3、無明顯的病理變化或寄生蟲寄生。該病可通過魚卵垂直傳播，也可經養(yǎng)殖水體水平傳播。來自受感染親魚的垂直傳播是魚苗感染的主要途徑。各種石斑魚以及生長階段的石斑魚均易感，但對幼體的危害更嚴重。 本試驗建立了逆轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)檢測點帶石斑魚神經壞死病毒(NNV)的檢測方法，并應用到傳染病調查和廈門1:2岸進出境魚類病害檢疫中。同時，用組織切片法對石斑魚腦部和視網膜的特征性病變進行觀察驗證，也說明該檢測方法具有良好的特異性

4、和敏感性，能夠檢測到Pg級的核酸量。證明該方法是一種快速、簡便、準確的檢測方法。應用該方法對廈門地區(qū)海域十幾種海洋魚類進行檢測，發(fā)現了有些蘭子魚，黃鰭鯛呈陽性。說明廈門海區(qū)神經壞死病毒主要感染石斑魚類及少量其它魚類。 采用TaqMan探針技術，并且將假病毒技術構建的含有神經壞死病毒RNA2基因組的MS2噬菌體假病毒作為陽性質控品，建立了TaqMan探針檢測點帶石斑魚神經壞死病毒的熒光定量PCR方法，對影響PCR反應的Mg<'2+

5、>濃度和退火溫度等條件進行了優(yōu)化，并建立了標準曲線，能夠在檢測中病毒檢測中進行絕對定量，最低能檢測10個病毒，在實際檢測運用中取得很好的效果。 本文還首次測定了點帶石斑魚神經壞死病毒(MCNNV)RNA1和RNA2基因組的全序列。RNA1由3103個核苷酸組成，含有一個編碼982個氧基酸的開放閱讀框，分子量為110.40 kD．；RNA2由1433個核苷酸組成，含有一個編碼338個氨基酸的開放閱讀框，分子量為37.06 kD。對