鈦顆粒負(fù)荷下淫羊藿苷對(duì)成骨細(xì)胞增殖、分化的影響及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：探討鈦顆粒（titanium particle, Ti）負(fù)荷下淫羊藿苷(Icariin, ICA)對(duì)成骨細(xì)胞株MC3T3-E1細(xì)胞增殖、分化的影響及其可能的作用機(jī)制。
　　方法：實(shí)驗(yàn)分為空白組，Ti顆粒組和藥物組；制備含有Ti和不同濃度ICA的成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基，檢測(cè)淫羊藿苷的細(xì)胞毒性；采用CCK-8法檢測(cè)0.1mg/mlTi和不同濃度ICA（10-7-10-4 M）處理MC3T3-E1細(xì)胞1天，3天，7天后的細(xì)胞增殖活性；以茜

2、素紅鈣化染色法檢測(cè)成骨細(xì)胞鈣化情況；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)細(xì)胞上清液中堿性磷酸酶（ALP）、骨鈣素(OCN)、Ⅰ型膠原蛋白-α(collagenⅠα, COLⅠα)的含量，以逆轉(zhuǎn)率-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）檢測(cè)Runx-2、Osterix基因mRNA表達(dá)情況。
　　結(jié)果：細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示ICA的為10-7，10-6 M，10-5 M，10-4 M時(shí)MC3T3-E1細(xì)胞存活率（%）分別為：96.68±4.00，

3、98.23±7.55，93.88±8.29，88.08±5.26，均大于50%，且各濃度組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CCK-8結(jié)果表明，細(xì)胞培養(yǎng)3天和7天后，與對(duì)照組（0.1mg/mlTi）比較，含有ICA（10-7-10-5 M）的藥物組細(xì)胞增殖活性增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而與空白組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；藥物組中10-4 M ICA作用3天和7天后細(xì)胞增殖能力明顯降低，與空白組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。MC3T3-E1細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)21d后，

4、茜素紅染色結(jié)果顯示空白組、藥物組紅染區(qū)域較多，Ti顆粒組紅染區(qū)域較少，光鏡下計(jì)數(shù)礦化結(jié)節(jié)數(shù)，并運(yùn)用Image-proplus軟件對(duì)各組細(xì)胞形成的鈣結(jié)節(jié)數(shù)量進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)和作圖，由表3和圖4可見(jiàn)， ICA（10-7-10-5 M）礦化結(jié)節(jié)數(shù)分別為1884.33±179.19，2050.00±169.92，1872.67±85.33，與Ti組（鈣結(jié)節(jié)數(shù)528.33±55.89）比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　ELISA結(jié)果顯示，鈦顆粒負(fù)荷下

5、細(xì)胞培養(yǎng)7天后，藥物組（ICA10-7-10-5 M）ALP（IU/L）含量分別為：4.76±0.54，4.99±0.69，4.84±0.91；COLⅠα（μg/L）含量分別為：21.41±2.32，22.85±2.60，21.43±2.19；OCN（ng/ml）含量分別為：57.99±3.07，59.96±4.48，57.78±4.40；與對(duì)照組ALP（IU/L）含量為：3.72±0.39，COLⅠα（μg/L）含量為：17.97±2

6、.07，OCN（ng/ml）含量為：50.37±4.76，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　RT-PCR結(jié)果顯示，鈦顆粒負(fù)荷下細(xì)胞培養(yǎng)7天后，藥物組（ICA10-7-10-5 M）Runx-2基因mRNA CT值分別為：20.91±4.40，31.40±6.36，14.34±0.94；Osterix基因mRNA CT值分別為：1.17±0.17，1.25±0.42，1.03±0.29；與對(duì)照組Runx-2及Osterix基因mRNA CT值