淫羊藿苷對成骨細(xì)胞BMP-2表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、淫羊藿苷(icariin，ICA)是淫羊藿主要有效成分之一?，F(xiàn)代中藥藥理學(xué)認(rèn)為淫羊藿具有補(bǔ)腎壯陽，益精健骨的功效，主要化學(xué)成分為黃酮類化合物，包括淫羊藿苷、淫羊藿次苷、脫水淫羊藿素等。轉(zhuǎn)移生長因子(transforming growth factor，TGF)超家族對成骨細(xì)胞的形態(tài)學(xué)發(fā)生、增殖、分化和凋亡中起重要作用，骨形成蛋白(bone morphogenetic proteins，BMP)是轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)超家族中的一

2、組多功能細(xì)胞因子，具有誘導(dǎo)間充質(zhì)細(xì)胞遷徙、增殖、分化，最終導(dǎo)致軟骨、骨形成的作用，在體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)都證明BMP-2有很強(qiáng)的促進(jìn)成骨細(xì)胞分化和誘導(dǎo)體外成骨的能力．本實(shí)驗(yàn)探討淫羊藿苷對成骨細(xì)胞BMP-2表達(dá)的影響，為淫羊藿苷促進(jìn)成骨細(xì)胞生長提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并為淫羊藿苷用于骨科臨床調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞的功能提供理論依據(jù)。 目的：檢測淫羊藿苷對體外培養(yǎng)的成骨細(xì)胞MC3T3-E1中BMP-2表達(dá)影響。 方法：MC3T3-E1細(xì)胞分成4組培養(yǎng)

3、，用0、10、20、40ng/ml不同濃度的淫羊藿苷刺激MC3T3-E1細(xì)胞。用倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況；通過四甲基噻唑藍(lán)(MTT)法測繪細(xì)胞生長曲線及流式細(xì)胞檢測儀測定細(xì)胞生長周期，描述MC3T3-E1細(xì)胞在淫羊藿苷刺激下的增值能力；通過細(xì)胞免疫化學(xué)染色和Western bloting對MC3T3-E1細(xì)胞BMP-2蛋白表達(dá)進(jìn)行測定． 結(jié)果： 1、在淫羊藿苷刺激下，MC3T3-E1細(xì)胞呈多角形，緊密全層排列，胞漿

4、豐富，染色質(zhì)松散，符合成骨細(xì)胞特點(diǎn)； 2、10，20ng/ml濃度淫羊藿苷可使MC3T3-E1細(xì)胞的生長曲線明顯上移，方差分析顯示10、20ng/ml組MTT OD值較0、40ng/ml組有顯著性差異(P<0.01)；10、20、40ng/ml可使MC3T3-E1S期細(xì)胞百分率升高，G1期細(xì)胞百分率減少，其中10ng/ml組、20ng/ml組作用更為顯著，各組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)； 3、熒光顯微鏡下可見

5、DAPI標(biāo)記的MC3T3-E1細(xì)胞核呈藍(lán)色熒光，而免疫細(xì)胞化學(xué)染色BMP-2蛋白的表達(dá)呈現(xiàn)出綠色熒光，對照組和各試驗(yàn)組免疫化學(xué)染色均為陽性，其陽性表達(dá)分布在胞漿內(nèi)，10ng/ml組、20ng/ml組陽性細(xì)胞數(shù)較0ng/ml組、40ng/ml組明顯增多，熒光強(qiáng)度增強(qiáng)； 4、在31KD各試驗(yàn)組均出現(xiàn)目標(biāo)條帶表達(dá)，其中10ng/ml組、20ng/ml組MC3T3-E1細(xì)胞BMP-2蛋白量隨ICA濃度的增加而增加，呈劑量依賴性特點(diǎn)；40

6、ng/ml組BMP-2蛋白表達(dá)量較對照組略有增加，但與10ng/ml組、20ng/ml組比較反而降低。 結(jié)論： 1、細(xì)胞生長曲線明顯上移和細(xì)胞生長周期S期細(xì)胞百分率升高，G1期細(xì)胞百分率減少提示淫羊藿苷可以促進(jìn)成骨細(xì)胞MC3T3-E1增殖； 2、通過細(xì)胞免疫化學(xué)染色和Western bloting對MC3T3-E1細(xì)胞BMP-2蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測，各實(shí)驗(yàn)組陽性表達(dá)與對照組比較明顯增強(qiáng)提示淫羊藿苷可以增加成骨細(xì)胞BM