兔睪丸缺血再灌注損傷及其保護措施的機理研究.pdf

1、目的:基于睪丸扭轉(zhuǎn)建立兔子睪丸缺血再灌注損傷模型，結合氧化應激指標及細胞凋亡因子檢測探索睪丸缺血預處理、后處理及聯(lián)合處理對睪丸缺血再灌注損傷的保護作用及潛在調(diào)控機理。
　　方法:選擇雄性新西蘭大白兔30只，隨機分為5個組:A組:對照組，暴露右側(cè)精索，不作缺血處理并關閉;B組:缺血再灌注組（I/R），使用無創(chuàng)血管夾閉右側(cè)精索致睪丸缺血60min，再灌注3d;C組:預處理組，缺血再灌注前夾閉精索3次（缺血5min/次+灌注5min/次

2、），夾閉右側(cè)精索致缺血60min，再灌注3d;D組:后處理組，夾閉右側(cè)精索致缺血60min后，進行3次缺血再灌注（再灌注5s/次+再缺血5s/次），再灌注3d;E組:聯(lián)合處理組，進行缺血再灌注前夾閉精索3次（缺血5min/次+灌注5min/次），夾閉右側(cè)精索致缺血60min后，進行3次缺血再灌注（再灌注5s/次+再缺血5s/次），再灌注3d。造模完成后，采用3％巴比妥鈉麻醉兔子后采集血液并分離血清測定血清睪酮含量;接著分離睪丸組織，按照

3、缺血側(cè)及健側(cè)分組后一部分進行裂解后按照MDA、PC、NO、SOD、MPO、GSH-Px酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒所述步驟進行檢測分析表達水平變化，一部分組織樣本采用Western blot法進行檢測分析Bcl-2，Bax表達水平，其余組織樣本采用10％中性福爾馬林固定后進行HE染色和TUNEL細胞凋亡檢測。
　　結果:與正常對照A組相比，缺血B組、缺血預處理C組、缺血后處理D組及聯(lián)合處理E組后血清睪酮表達水平顯著降低;缺血B組、缺血預

4、處理C組、缺血后處理D組及聯(lián)合處理E組術前與術后比較發(fā)現(xiàn)，血清睪酮表達水平明顯降低。與正常對照A組及缺血B組健側(cè)相比，缺血B組缺血側(cè)MDA、PC、NO、SOD、MPO、GSH-Px表達水平顯著升高;與缺血B組缺血側(cè)相比，缺血預處理C組、缺血后處理D組及聯(lián)合處理E組缺血側(cè)MDA、PC、NO、SOD、MPO、GSH-Px表達水平顯著降低，且三種處理方式之間無統(tǒng)計學差異。病理染色結果顯示，與正常對照A組及缺血B組健側(cè)相比，缺血B組缺血側(cè)睪丸組

5、織內(nèi)大部分生精小管結構被破壞，生精小管內(nèi)各級生精細胞結構消失，可見凋亡的生精細胞，間質(zhì)及管腔內(nèi)有淡伊紅色水腫液滲出，凋亡指數(shù)明顯升高，Johnsen評分顯著降低;與缺血B組缺血側(cè)相比，缺血預處理C組、缺血后處理D組及聯(lián)合處理E組缺血側(cè)睪丸組織生精小管結構完整，細胞層次清楚，排列整齊，大部分管腔內(nèi)有精子生成，部分小管管腔內(nèi)有少量淡伊紅色水腫液，凋亡指數(shù)明顯降低，Johnsen評分顯著增加，且三種處理方式之間無統(tǒng)計學差異。同樣地，與正常對照

6、A組和缺血B組健側(cè)相比，缺血B組缺血側(cè)Bcl-2/Bax比值顯著降低;與缺血B組缺血側(cè)相比，缺血預處理C組、缺血后處理D組及聯(lián)合處理E組缺血側(cè)Bcl-2/Bax比值明顯增加并趨近正常水平。
　　結論:缺血預處理、后處理及聯(lián)合處理可通過調(diào)控氧化應激指標及細胞凋亡水平明顯改善兔睪丸缺血再灌注損傷，且三種處理方式對睪丸缺血再灌注損傷的保護作用相同。不僅為睪丸缺血再灌注損傷的潛在保護機理研究提供了重要方法參考，而且為睪丸缺血再灌注損傷的臨