小型豬阻塞性慢性胰腺炎高分辨核磁共振質子波譜代謝特征研究.pdf

1、第一部分，小型豬阻塞性慢性胰腺炎模型建立及其CT表現(xiàn)
　　 研究目的：
　　 建立小型豬阻塞性慢性胰腺炎模型，觀察造模成功率，探討不同程度CP的CT表現(xiàn)、動態(tài)增強模式與病理分級的相關性。
　　 研究方法：
　　 雌性巴馬小型豬36只，隨機分為實驗組(n=12)和對照組(n=24)。適應性飼養(yǎng)一周，實驗前禁食24h，術前4h禁水。對實驗組小豬麻醉后在無菌條件下進行手術，暴露胰腺頭頸部，游離出主胰管，用3.0

2、絲線把主胰管與雙股3.0聚內烯線一起結扎，聚丙烯線溶解后即為超過75％的主胰管部分被結扎。在主胰管不全結扎處同時結扎胰腺組織，以防止副胰管或側枝胰管引流胰液。對照組開腹僅翻動胰腺及腸道，未結扎胰管或胰腺。術后按小型豬按需給予飲食。在CP造模后4、8、12周隨機選取1/3實驗動物(實驗組8只，對照組4只)行CT檢查并采集血液、尿液和胰腺透析液標本。完成CT掃描后處死動物，獲取胰腺大體組織進行代謝物檢測，病理分期按照胰腺腺泡萎縮、炎細胞浸潤

3、和纖維化程度(主要根據(jù)胰腺纖維化的程度)，將CP分為三期：0期(正常)、Ⅰ期(輕型CP)、Ⅱ期(中度CP)、Ⅲ期(重度CP)。
　　 結果：
　　 36只小型豬中共33只小型豬完成計劃實驗過程，具中，對照組12只均存活，實驗組21只存活，意外死亡3只，1只因麻醉意外；另外2只死于感染，實驗組24只中19只建模成功，建模成功率79.2％(19/24)。實驗組存活的21只動物中，病理分期如下：0期2只(9.5％)、Ⅰ期(輕型

4、)8只(38.1％)、Ⅱ期(中度)4只(19％)、Ⅲ期(重度)7只(33.4％)。對照組12只小型豬胰腺組織均未見異常。CT檢查提示：0期胰腺形態(tài)未見萎縮，密度均勻，強化均勻一致，主胰管及分支胰管均未顯示；Ⅰ期(n=8)CT圖像上，6只胰腺形態(tài)未見明顯改變，邊緣光整，胰腺實質強化均勻一致，2只胰腺輕度腫大且平掃密度較低，5只小型豬主胰管未見顯示，3只胰管可見主胰管，但直徑均不超過1mm，且分支胰管未顯示；Ⅱ期(n=4)胰腺萎縮3只，邊緣

5、毛糙、欠光整，增強后胰腺實質強化欠均勻，內可見散在細點狀、小斑片狀低密度影。主胰管不同程度擴張，1只直徑3mm，且可見分支胰管輕度擴張，2只直徑2mm，1只直徑1mm；Ⅲ期(n=7)胰腺萎縮均較明顯，邊緣欠光整，呈細鋸齒狀，其中5只胰腺實質及包膜下出現(xiàn)羽毛狀低密度影。增強后低密度影強化程度較周圍胰腺實質低。
　　 結論：
　　 巴馬小型豬主胰管不全結扎法建立CP模型成功率高，CP的纖維化程度與梗阻時間呈良好的相關性；實驗

6、組不同病理分期各組見強化CT值在30秒和35秒時間點差別有顯著統(tǒng)計學意義；小型豬CP模型的CT表現(xiàn)與人類CP十分相似，有可能為研究不同病理程度的CP的影像學表現(xiàn)提供良好的平臺。
　　 第二部分，小型豬阻塞性慢性胰腺炎高分辨核磁共振質子波譜代謝特征研究
　　 研究目的：
　　 對小型豬慢性胰腺炎(Chronicpancreatitis，CP)模型離體胰腺組織塊行高分辨魔角旋轉核磁共振波譜分析(HR-MASNMR)，

7、探索慢性胰腺炎不同發(fā)展階段的代謝變化規(guī)律。
　　 研究方法：
　　 獲取CP模型豬的新鮮胰腺組織，經(jīng)重水淋洗后，在BRUKERAVANCE-600譜儀上進行檢測。按照胰腺腺泡萎縮、炎細胞浸潤和纖維化程度(主要根據(jù)胰腺纖維化的程度)，將CP分為三期：Ⅰ期(輕型CP)、Ⅱ期(中度CP)、Ⅲ期(重度CP)。比較小型豬正常胰腺和經(jīng)病理檢測確定為Ⅱ、Ⅲ期的較為典型的慢性胰腺炎離體組織塊的代謝特征及波峰強度數(shù)值，分析代謝物改變與病理

8、的關系。在HRMAS-NMR1H譜解析的基礎上，運用主成分分析法(principalcomponentanalysis，PCA)分析幼豬正常胰腺組織與慢性胰腺炎的特征代謝變量模型，由CPMG測得的壓制掉大分子物質的一維1H譜數(shù)據(jù)用于主成分分析。利用Bruker公司的Topspin3.0軟件程序對數(shù)據(jù)進行相位基線校正，并利用Topspin3.0軟件對圖譜進行降維簡化處理，同時利用AMIX打包軟件對簡化后的數(shù)據(jù)進行PCA處理，得到相應的得分

9、圖和負載圖。以病理證實的Ⅱ期、Ⅲ期CP的胰腺組織為實驗組(11只)，以模型對照組中小型豬正常胰腺組織為對照組(12只)。使用SPSS17.0對CP胰腺組織和正常胰腺組織代謝物濃度進行LSD-t檢驗。
　　 結果：
　　 1、小型豬慢性胰腺炎模型建立結果
　　 36只小型豬中共33只小型豬存活。其中，模型對照組12只均存活，模型實驗組24只中21只存活，意外死亡3只。模型實驗組24只中19只成功建立不同程度慢性胰腺

10、炎模型，2只病理改變不明顯，慢性胰腺炎模型成功率79.2％(19/24)。
　　 2、病理結果
　　 實驗組存活的21只動物中，病理分期如下：0期2只(9.5％)、Ⅰ期(輕型CP)8只(38.1％)、Ⅱ期(中度CP)4只(19％)、Ⅲ期(重度CP)7只(33.4％)。對照組12只小型豬胰腺組織均未見異常。
　　 3、小型豬正常胰腺與CP胰腺組織MRS代謝產(chǎn)物差異
　　 本研究以病理證實的Ⅱ期、Ⅲ期CP的胰

11、腺組織為實驗組(11只)，以小型豬正常胰腺組織為對照組(12只)。
　　 發(fā)現(xiàn)實驗組代謝產(chǎn)物中的乳酸(Lac)(δ=1.34，4.06)、N－乙酰糖蛋白(NAC)(δ=2.06)、乙酰乙酸(Acet)(δ=2.22)峰強度顯著增加(P<0.05)；纈氨酸(Val)(δ=1.02)、丙氨酸(Ala)(δ=1.46)、亮氨酸(Leu)(δ=1.70)、乙酸(Ace)(δ=1.94)、丙酮酸(Pyr)(δ=2.34)、天冬氨酸(Asp

12、)(δ=2.62)、谷氨酸(Glu)(δ=2.42)、肌氨酸(Cre)(δ=3.10)、膽堿(Cho)(δ=3.22)、甜菜堿(Bet)(δ=3.26)、?；撬?Tau)(δ=3.38)、甘油(Gly)(δ=3.66)、酪氨酸(Tyr)(δ=3.98，6.90,7.18)、β-葡萄糖(β-Glc)(δ=4.62)、尿嘧啶核苷(Uri)(δ=5.78)、胞嘧啶(Cyt)(δ=6.06)和苯丙氨酸(Phe)(δ=7.34，7.42)峰強度顯