MicroRNA與異煙肼所致小鼠抗結(jié)核藥物性肝損傷關(guān)系的研究.pdf

1、目的：采用INH誘導(dǎo)的小鼠抗結(jié)核藥物性肝損傷模型，觀察miR-122、miR-155及氧化損傷指標(biāo)的動(dòng)態(tài)變化，初步探討miR-122、miR-155及氧化應(yīng)激在抗結(jié)核藥物性肝損傷發(fā)生發(fā)展中的作用及關(guān)系，為抗結(jié)核藥物性肝損傷的早期診斷和發(fā)病機(jī)制研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：1）急性毒性實(shí)驗(yàn)：（1）實(shí)驗(yàn)對(duì)象：昆明小鼠，對(duì)照組（10只）給予生理鹽水，實(shí)驗(yàn)組（70只）予以INH（180mg/kg）灌胃處理，實(shí)驗(yàn)組分別在給藥后的0.25、0

2、.75、1.5、6、12、18、24h和對(duì)照組24h留取10只小鼠的血清和肝組織標(biāo)本。（2）實(shí)驗(yàn)方法：HE染色法，光學(xué)顯微鏡下觀察肝組織病理學(xué)變化；全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清ALT和AST水平；實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)肝組織中miR-122和miR-155表達(dá)。（3）統(tǒng)計(jì)分析：采用SPSS17.0數(shù)據(jù)分析，數(shù)據(jù)以-x±s表示，計(jì)量資料采用單因素方差法，相關(guān)性分析采用Pearman相關(guān)性分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2）慢

3、性毒性實(shí)驗(yàn)：（1）實(shí)驗(yàn)對(duì)象：除實(shí)驗(yàn)組每天予以INH（90 mg/kg）灌胃，其中實(shí)驗(yàn)組分別在連續(xù)給藥后的1D、3D、5D、1W、2W、3W、4W和對(duì)照組4W留取小鼠的血清和肝組織標(biāo)本，其他同急性毒性實(shí)驗(yàn)。（2）實(shí)驗(yàn)方法：組織病理學(xué)、ALT和AST檢測(cè)同急性毒性實(shí)驗(yàn)，一般生化分析法檢測(cè)CuZnSOD和MDA的水平；酶聯(lián)免疫吸附吸附法檢測(cè)MT和MRPS11蛋白表達(dá)水平；miR-122表達(dá)水平檢測(cè)同急性毒性實(shí)驗(yàn)。（3）統(tǒng)計(jì)分析：同急性毒性實(shí)驗(yàn)

4、。
　　結(jié)果：1）急性毒性實(shí)驗(yàn)：（1）肝組織病理學(xué)：給藥后的0.25h，可見少量肝細(xì)胞腫脹，隨給藥時(shí)間的變化并逐漸加重。（2）ALT和AST：小鼠血清中ALT和AST在0.75h出現(xiàn)顯著性變化，且兩者均上升到最大值。（3）miR-122和miR-155：給藥后miR-122整體呈下降趨勢(shì)，0.25h即開始發(fā)生顯著性下降為（56.50±27.77）％，（P<0.05）；miR-155呈上升趨勢(shì)，0.75h開始出現(xiàn)顯著性上升（11.2

5、5±1.43）倍。（4）相關(guān)性分析：miR-122/miR-155比值與ALT和AST均呈負(fù)相關(guān)性（r=-0.356，r=-0.246；P<0.05），且與肝組織病理學(xué)評(píng)分有很好的負(fù)相關(guān)性（r=-0.779，P<0.01）。
　　2）慢性毒性實(shí)驗(yàn)：（1）肝組織病理學(xué)：連續(xù)給藥后的第3D，顯微鏡下可見少量肝細(xì)胞腫脹，胞漿稀疏。隨著用藥時(shí)間延長(zhǎng)，肝組織損傷程度逐漸加重。（2）ALT和AST：兩者分別在2W和3W出現(xiàn)顯著性變化。（3）C

6、uZnSOD和MDA：與對(duì)照組相比5D發(fā)生了顯著性變化。（4）miR-122：給藥后整體呈下降趨勢(shì)，第3D表達(dá)開始下降（88.72±5.15）％（P<0.05）。（5）MT和MRPS11：與對(duì)照組相比兩者均在第3D出現(xiàn)變化，且在2W分別下降到最小值（908.68±152.87）pg/ml和（9.72±1.31）pg/ml（P<0.01）。（6）相關(guān)性分析：miR-122與CuZnSOD、MDA和MT存在相關(guān)性（r=0.240，r=-0.

7、311，r=0.415；均P<0.05)；MRPS11與CuZnSOD，MDA和MT存在相關(guān)性（r=0.313，r=-0.250，r=0.366；均P<0.05）。
　　結(jié)論：急/慢性毒性實(shí)驗(yàn)中，miRNA與ADLI存在相關(guān)性，miR-122低表達(dá)和miR-155高表達(dá)均與ADLI發(fā)生發(fā)展有關(guān)，miR-122/miR-155比值有望成為ADLI早期診斷標(biāo)志物，且 miR-122可能通過(guò)調(diào)節(jié) MRPS11參與 ADLI中的氧化應(yīng)激反