間斷性復(fù)灌干預(yù)對缺血腦的保護及其機制研究.pdf

1、腦血管疾病已成為中國第二位死亡原因,其中約80％為缺血性疾病。溶栓治療后腦組織將面臨再次損傷,即缺血／復(fù)灌損傷(ischemia／reperfusion injury,I／R損傷)。間斷性復(fù)灌干預(yù)(interrupted reperfusion intervention,IRIV)治療是在復(fù)灌初期對復(fù)灌血流實施一系列短暫的機械性梗阻和再灌注的方法,已被證明具有神經(jīng)保護作用,但對其保護機制的研究仍存在諸多空白。
　　 本論文用C5

2、7BL／6小鼠,通過手術(shù)前后局部腦血流多普勒檢測,橫桿跑動測試,建立雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎(bilateral common carotid arterial occlusion,BCCAO)20 min所導(dǎo)致的小鼠全腦缺血模型。
　　 在該模型上,我們對IRIV干預(yù)程序及其治療時間窗進行了優(yōu)化,利用橫桿跑動、爬桿和水迷宮實驗各參數(shù)作為評價指標,對3個循環(huán)的10 s／10 s、15 s／15 s、30 s／30s三種不同的夾閉／復(fù)灌I

3、RIV程序的神經(jīng)功能保護作用進行評測,選取最優(yōu)IRIV干預(yù)程序組進行治療時間窗的的確定。結(jié)果顯示,15 s／15 s IRIV程序具有較好的神經(jīng)功能保護作用,在缺血后的60 min內(nèi)效果較好。
　　 NADPH氧化酶(NADPH oxidase,NOX)是被復(fù)灌事件激活的體內(nèi)重要氧化酶,我們利用NOX抑制劑Apocynin結(jié)合IRIV或兩種干預(yù)單獨使用的方式,觀察小鼠I／R損傷后在橫桿跑動、爬桿和水迷宮實驗中的表現(xiàn),小鼠腦部皮層

4、、海馬和紋狀體神經(jīng)元的存活率,腦組織中NOX活性及其重要亞基gp91phox和p47phox的表達,p47phox的轉(zhuǎn)位,以及Racl的活化水平,以探究IRIV是否通過抑制NOX發(fā)揮神經(jīng)保護作用。結(jié)果顯示,IRIV通過減少p47phox轉(zhuǎn)位,降低NOX的裝配,并主要通過降低Racl的活化水平抑制已裝配NOX的激活。
　　 復(fù)灌后NMDA受體的激活可影響NOX的活性,我們應(yīng)用腦室給NMDA或MK-801結(jié)合IRIV的方式,觀察I／

5、R損傷后腦組織中神經(jīng)元內(nèi)游離Ca2+濃度,Racl的表達和活化,NOX活性水平,以及NR2A和NR2B亞基的表達,以探究IRIV是否通過NMDA受體的激活抑制NOX。結(jié)果顯示,IRIV可抑制缺血／復(fù)灌后NR2A和NR2B亞基表達和胞體內(nèi)游離Ca2+濃度的增高,從而影響Racl活化,抑制NOX活性升高。
　　 為進一步探究NMDA和NOX之間的聯(lián)系,我們建立離體培養(yǎng)海馬神經(jīng)元氧糖剝奪／復(fù)灌(oxygen and glucose d

6、eprivation／reperfusion,OGD／RP)模型,應(yīng)用NMDA受體激動劑NMDA和抑制劑MK-801、經(jīng)典型PKC(classic PKC,cPKC)激動劑PMA和抑制劑G(o)6983等工具藥,觀察OGD／RP后神經(jīng)元內(nèi)游離Ca2+濃度,Racl、gp91phox和p47phox的表達水平,以及NOX活性水平.結(jié)果顯示,復(fù)灌損傷后NOX活性受NMDAR-Ca2+-cPKC-Racl通路調(diào)控。
　　 綜上,IRI