腦缺血保護新藥復(fù)腦素的制備工藝及其作用機制研究.pdf

1、本研究采用正交試驗設(shè)計確定了復(fù)腦素(FNS)的提取工藝，并通過對柱填料A和B的考察，確定了FNS的純化工藝，通過中試放大對所制定的工藝進行了驗證。結(jié)果表明本工藝從紅花藥材到FNS成品，平均總得率在1.0％以上，純度在90％以上。 本課題對FNS防治腦缺血再灌注損傷的保護作用及其機制進行了研究。分別考察了FNS對栓線法大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的治療作用；對小鼠全腦缺血的保護作用；對體外缺氧.復(fù)氧造成大鼠大腦皮層神經(jīng)細胞損傷的保護

2、作用以及小鼠急性毒性試驗。實驗結(jié)果表明：第一、大鼠腦缺血 1 小時后尾靜脈注射FNS，可使腦梗塞體積縮小；偏癱癥狀評分減?。荒X水腫程度減輕，且作用強度與劑量存在依賴關(guān)系。病理檢查顯示，F(xiàn)NS 能減輕大鼠缺血側(cè)大腦出血壞死、減輕神經(jīng)細胞和神經(jīng)纖維的損傷，表明其對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷有顯著治療作用。第二、FNS 能顯著延長小鼠斷頭后張口呼吸持續(xù)時間、顯著提高腦組織中肌酸激酶含量并顯著降低腦組織中乳酸含量，表明其對小鼠斷頭全腦缺血損傷具

3、有保護作用。第三、FNS 對體外缺氧復(fù)氧造成大鼠大腦皮層神經(jīng)細胞損傷具有顯著保護作用。第四、FNS 毒性較小。研究結(jié)果表明，F(xiàn)NS 防治腦缺血功效確切。 在此基礎(chǔ)上模擬體內(nèi)缺血再灌注模型，研究了體外缺氧-復(fù)氧損傷模型中，F(xiàn)NS 對大鼠腦微血管內(nèi)皮細胞中內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)的影響，探討了FNS防治缺血再灌注損傷的作用機制。通過 Western blotting和免疫細胞化學分析，以及半定量的rt-PCR檢測分析，結(jié)果表明

4、：單純的缺氧-復(fù)氧可以使內(nèi)皮細胞中的eNOS減少、eNOS mRNA 含量減少、eNOS 蛋白含量減少，而FNS可以逆轉(zhuǎn)這種變化，使eNOS、eNOS mRNA、eNOS 蛋白含量均保持較高水平，表明它可以促進eNOS mRNA的合成，使得eNOS的表達增高。由于eNOS對于維持腦血管正常的張力、保持血管的通透性具有重要的作用，因此表明FNS對腦血管內(nèi)皮細胞中eNOS的影響可能是它防治缺血再灌注損傷的重要機制之一。本研究結(jié)果為將FNS