番石榴葉中皂苷、揮發(fā)油體外抗輪狀病毒作用的研究.pdf

1、研究背景： 輪狀病毒(Rotavirus，RV)是世界范圍內(nèi)引起嬰幼兒嚴重腹瀉的最主要原因，并成為嚴重的公共衛(wèi)生問題，特別是在發(fā)展中國家。在世界各國，90％以上的嬰幼兒在3歲之前均受到了RV的感染，在5歲以下腹瀉住院患兒中，RV感染病例占20％～70％，5歲以上的兒童幾乎全都感染過RV。人的一生可多次重復(fù)RV感染，但有癥狀感染主要發(fā)生在3歲以內(nèi)的嬰幼兒。全球每年有近60萬兒童死于RV感染性腹瀉，主要是在不發(fā)達國家。盡管發(fā)達國家因

2、此而死亡的較少，但為此各國都要承擔(dān)高額的醫(yī)療費用。以美國為例，用于治療RV腹瀉的費用每年高達4.54億美元。國內(nèi)研究表明在腹瀉住院兒童中，40％以上是RV感染所致。我國輪狀病毒死亡數(shù)估計每年至少達4萬人，成為公共衛(wèi)生資源的主要負擔(dān)。目前，病毒性腹瀉尚無特異的抗病毒藥物，而中醫(yī)藥呈現(xiàn)出獨特的優(yōu)勢。 番石榴葉對輪狀病毒性腹瀉療效確切，能夠顯著的改善腹瀉等癥狀。體外實驗亦證實番石榴葉能提高MA-104細胞對輪狀病毒的耐受，降低其毒力，

3、破壞輪狀病毒顆粒的外殼和內(nèi)核。發(fā)現(xiàn)不同的成分針對引起腹瀉的不同機制，多途徑發(fā)揮止瀉作用。如揮發(fā)油具有鎮(zhèn)痛、抗炎性能；槲皮素能抑制腸道收縮，緩解腸道痙攣，還可減少腸道水分和電解質(zhì)的分泌。本實驗主要研究番石榴葉的有效成分皂苷和揮發(fā)油體外直接抗輪狀病毒的作用。 目的： 利用體外培養(yǎng)及MTF法檢測番石榴葉中皂苷、揮發(fā)油的體外抗輪狀病毒作用，明確兩者在輪狀病毒感染的預(yù)防和治療作用。 方法： 1、將不同濃度的皂苷作用

4、于MA-104細胞，MTT法檢測細胞存活率，求出其半數(shù)細胞毒性濃度(mediantoxicconcentration，TC50)后，予TC50以下的不同濃度的皂苷對輪狀病毒感染細胞前后分別進行干預(yù)，檢測其對病毒感染細胞存活的影響，以明確皂苷對輪狀病毒感染的預(yù)防和治療作用； 2、將不同濃度的揮發(fā)油作用于MA-104細胞，MTT法檢測細胞存活率，求出其TC50后，予TC50以下的不同濃度的揮發(fā)油對輪狀病毒感染細胞前后分別進行干預(yù)，檢

5、測其對病毒感染細胞存活的影響，以明確揮發(fā)油對輪狀病毒感染的預(yù)防和治療作用。 結(jié)果： 1、細胞存活率和皂苷濃度間關(guān)系 經(jīng)Probit回歸分析得到皂苷TC50為112.24μg/nd。之后以100μg/ml、75μg/ml、50μg/ml、25μg/ml、1μg/ml預(yù)先作用細胞，再以RV感染細胞，或先以RV感染MA104細胞，再以上述不同濃度皂苷作用細胞，繼續(xù)培養(yǎng)48h后，皂苷100μg/ml、75μg/ml時細胞

6、病變較其它各組均較輕；MTT法檢測發(fā)現(xiàn)皂苷用于抗RV時，其預(yù)防和治療作用最高抑制率分別為62.12％和77.98％，半數(shù)抑制濃度(50％inhibitioncontraction，IC50)分別為63.83μg/ml和33.19μg/ml，治療指數(shù)分別1.76和3.38。并且在TC50范圍以下，不論治療或預(yù)防作用，隨著藥物濃度的增加，病毒抑制率明顯升高，呈量效關(guān)系。 2、細胞存活率和揮發(fā)油濃度間關(guān)系 經(jīng)Probit回歸分

7、析得到揮發(fā)油的TC50為4.09μl/ml。實驗結(jié)果表明，在揮發(fā)油預(yù)防作用時用4μl/ml、2μl/ml、1μl/ml、0.5μl/ml、0.25μl/ml分別預(yù)先處理細胞后，再以RV感染細胞，培養(yǎng)48小時后，其中揮發(fā)油4μl/ml組細胞病變明顯較其它各組輕。MTT法檢測發(fā)現(xiàn)揮發(fā)油用于預(yù)防輪狀病毒感染隨著藥物濃度的增加，RV的抑制率增加，表現(xiàn)出量效關(guān)系，其IC50為2.72μl/ml，治療指數(shù)為1.50.在揮發(fā)油治療作用時，先用RV感染