荊芥揮發(fā)油與主要成分體外抗流感病毒作用及TLR-IFN信號(hào)機(jī)制研究.pdf

1、目的：觀察荊芥揮發(fā)油及其主要成分胡薄荷酮、薄荷酮體外對(duì)甲型流感病毒鼠肺適應(yīng)株 A/PR/8/34（H1N1）在感染細(xì)胞中增殖的影響，并探討其抗病毒效應(yīng)的TLR/IFN信號(hào)機(jī)制，以期為荊芥揮發(fā)油的臨床應(yīng)用提供科學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：①采用 MTT法和細(xì)胞病變法（CPE）檢測(cè)藥物對(duì)狗腎傳代細(xì)胞（MDCK）的半數(shù)中毒濃度（TC50）及最大無毒濃度（TC0）。②紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)（血凝試驗(yàn)）檢測(cè)甲型流感病毒鼠肺適應(yīng)株 A/PR/8/34(H

2、1N1)滴度，根據(jù)Reed-Menuch法計(jì)算半數(shù)感染劑量（TCID50）。③MTT法和CPE法測(cè)定藥物體外抑制流感病毒增殖的半數(shù)有效濃度（IC50）和治療指數(shù)（TI）。④MTT法和CPE法測(cè)定藥物對(duì)病毒直接殺滅作用的IC50和TI。⑤Real-Time qRT-PCR法檢測(cè)藥物對(duì)H1N1感染MDCK細(xì)胞后8h細(xì)胞TLR7、IRAK4、TLR3、TRAF3和IFN-β mRNA表達(dá)水平的影響。⑤ELISA法檢測(cè)藥物對(duì)H1N1感染MDCK

3、細(xì)胞后8h細(xì)胞上清液中IFN-β水平的影響
　　結(jié)果：①荊芥揮發(fā)油、胡薄荷酮和薄荷酮對(duì) MDCK細(xì)胞的TC50分別為0.203mg/ml、0.358mg/ml與0.425mg/ml，TC0分別為0.1mg/ml、0.1mg/ml與0.25mg/ml。②荊芥揮發(fā)油和胡薄荷酮（3.13×10-3~0.1mg/ml）對(duì)流感病毒細(xì)胞內(nèi)增殖有抑制作用，其IC50分別為1.68×10-3mg/ml與1.94×10-3mg/ml，TI分別為12

4、0.83、184.54，呈一定劑量依賴性；薄荷酮對(duì)流感病毒細(xì)胞內(nèi)的增殖幾乎無抑制作用。③荊芥揮發(fā)油（3.13×10-3~0.1mg/ml）、胡薄荷酮（1.25×10-2~0.1mg/ml）及薄荷酮（7.8×10-3~0.1mg/ml）對(duì)流感病毒具有明顯直接殺滅作用，其IC50分別為3.12×10-3、7.16×10-3與1.94×10-3mg/ml，TI分別為63.99、50.00和82.88,呈一定劑量依賴性。④與病毒對(duì)照組相比，荊芥

5、揮發(fā)油0.1mg/ml濃度能顯著提高染毒MDCK細(xì)胞內(nèi)TLR7、IRAK4、TRAF3和IFN-βmRNA表達(dá)水平（P<0.001）；胡薄荷酮0.1mg/ml濃度顯著提高染毒MDCK細(xì)胞內(nèi)TLR7、IFN-β（P<0.001）和IRAK4 mRNA（P<0.01）表達(dá)水平；薄荷酮0.25mg/ml濃度一方面能提高染毒MDCK細(xì)胞內(nèi)TLR7和IRAK4 mRNA表達(dá)水平（P<0.05），另一方面顯著降低TLR3 mRNA表達(dá)水平（P<0.

6、001）。⑤與病毒對(duì)照組相比，荊芥揮發(fā)油和胡薄荷酮0.1mg/ml濃度均能顯著提高染毒 MDCK細(xì)胞上清液中IFN-β水平（P<0.001）。
　　結(jié)論：荊芥揮發(fā)油與胡薄荷酮體外對(duì)甲型流感病毒（H1N1）在 MDCK細(xì)胞中的增殖具有明顯抑制作用，薄荷酮作用不明顯；三者均表現(xiàn)出對(duì)流感病毒的直接殺滅作用。荊芥揮發(fā)油和胡薄荷酮抗病毒作用機(jī)制可能與激活 TLR7信號(hào)通路，活化通路中相關(guān)關(guān)鍵分子IRAK4，誘導(dǎo)IFN-β高表達(dá)，啟動(dòng)病毒模式