B7-H4在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、目的：1.探討協(xié)同刺激分子B7-H4在腎透明細(xì)胞癌（clear cell renal cell carcinoma，ccRCC）組織以及ccRCC患者血液樣本中的表達(dá)及其臨床意義；
　　2.研究腎癌免疫治療藥物IL-2、IFN-α和IFN-γ對(duì)人ccRCC細(xì)胞株（786-0細(xì)胞）增殖活性以及B7-H4分子表達(dá)的影響。
　　方法：1.采用免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)154例ccRCC患者腫瘤組織以及對(duì)應(yīng)的癌旁正常腎臟組織中B7-H

2、4分子的表達(dá)情況，探討ccRCC組織中B7-H4的表達(dá)水平及其與ccRCC患者臨床病理特征性指標(biāo)間的關(guān)系；
　　2.采用ELISA方法檢測(cè)43例ccRCC患者血液樣本中sB7-H4（soluble B7-H4，可溶性B7-H4）的表達(dá)情況，探討sB7-H4的表達(dá)與患者臨床病理指標(biāo)之間的關(guān)系；
　　3.用不同濃度的IL-2、IFN-α和IFN-γ刺激786-0細(xì)胞24小時(shí)，采用CCK-8方法檢測(cè)IL-2、IFN-α和IFN-γ

3、對(duì)體外培養(yǎng)的ccRCC細(xì)胞（786-0細(xì)胞）增殖活性的影響；
　　4.用濃度為1000U/ml（786-0細(xì)胞的增殖抑制率控制在1％）的IL-2、IFN-α和IFN-γ刺激786-0細(xì)胞24小時(shí)，采用RT-PCR方法檢測(cè)刺激后786-0細(xì)胞B7-H4 mRNA的表達(dá)，探討IL-2、IFN-α和IFN-γ對(duì)786-0細(xì)胞B7-H4 mRNA表達(dá)的影響；
　　5.用濃度為1000U/ml的IL-2、IFN-α和IFN-γ刺激78

4、6-0細(xì)胞24小時(shí)，采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測(cè)刺激后786-0細(xì)胞B7-H4膜蛋白的表達(dá)，探討IL-2、IFN-α和IFN-γ對(duì)786-0細(xì)胞B7-H4分子表達(dá)的影響；
　　6.用濃度為1000U/ml的IL-2、IFN-α和IFN-γ刺激786-0細(xì)胞24小時(shí)，采用ELISA方法檢測(cè)刺激后786-0細(xì)胞培養(yǎng)液上清中sB7-H4的表達(dá)，探討IL-2、IFN-α和IFN-γ對(duì)786-0細(xì)胞sB7-H4分子表達(dá)的影響；
　　7.

5、用濃度為1000U/ml的IL-2、IFN-α和IFN-γ刺激786-0細(xì)胞24小時(shí)，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)刺激后786-0細(xì)胞膜B7-H4分子的表達(dá)，探討IL-2、IFN-α和IFN-γ對(duì)786-0細(xì)胞B7-H4分子表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：1.B7-H4分子在ccRCC組織中可見(jiàn)表達(dá)，多定位于細(xì)胞膜，少部分表達(dá)于胞質(zhì)，在正常腎臟組織中未見(jiàn)表達(dá)，ccRCC患者腫瘤組織石蠟切片中B7-H4表達(dá)陽(yáng)性率為59.09%(91/154)，而且B

6、7-H4表達(dá)與臨床病理指標(biāo)（原發(fā)腫瘤分期、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及臨床分期）明顯相關(guān)（P﹤0.05），而與ccRCC患者一般情況（性別、年齡）無(wú)相關(guān)；
　　2.ccRCC患者血液中sB7-H4表達(dá)的陽(yáng)性率為53.49%（23/43），而且sB7-H4在患者血液中的表達(dá)與ccRCC患者的一般情況（性別、年齡）無(wú)明顯相關(guān)，而與ccRCC患者的臨床病理指標(biāo)（原發(fā)腫瘤分期、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及臨床分期）呈現(xiàn)明顯相關(guān)（P﹤0.05）

7、；
　　3.隨著藥物濃度的增加，IL-2、IFN-α和IFN-γ對(duì)786-0細(xì)胞的增殖抑制逐漸增加，1%抑制率的最大藥物濃度為1000 U/ml；
　　4. RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示：786-0細(xì)胞經(jīng)IL-2、IFN-α和IFN-γ刺激24小時(shí)后， B7-H4 mRNA的表達(dá)較未刺激組細(xì)胞明顯增加；
　　5.免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示：786-0細(xì)胞經(jīng)IL-2、IFN-α和IFN-γ刺激24小時(shí)后，細(xì)胞B7-H4陽(yáng)性表達(dá)率明

8、顯高于未刺激組786-0細(xì)胞；
　　6. ELISA法檢測(cè)顯示：786-0細(xì)胞經(jīng)IL-2、IFN-α和IFN-γ刺激24小時(shí)后，細(xì)胞上清液中sB7-H4的濃度分別為44.89±0.97ng/ml、46.74±2.25ng/ml和47.31±1.12ng/ml，明顯高于未經(jīng)刺激的786-0細(xì)胞組34.42±1.69ng/ml。經(jīng)單因素方差分析，其差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），兩兩比較可知，各實(shí)驗(yàn)組間差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.

9、05）；
　　7.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示：786-0細(xì)胞經(jīng)IL-2、IFN-α和IFN-γ刺激24小時(shí)后，細(xì)胞B7-H4陽(yáng)性表達(dá)率分別為（44.89±0.94）%、（46.41±0.55）%和（54.18±1.42）%，明顯高于未刺激組786-0細(xì)胞（30.45±0.96）%。經(jīng)單因素方差分析，其的差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），兩兩比較可知：對(duì)照組與3個(gè)藥物刺激組之間的差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），IFN-γ刺激組與其余3

10、組之間的差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），IL-2刺激組與IFN-α刺激組差距無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.235）。
　　結(jié)論：1. B7-H4分子在ccRCC患者腫瘤組織和患者血液樣本中存在表達(dá)，而且其表達(dá)與患者的臨床病理指標(biāo)（原發(fā)腫瘤分期、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及臨床分期）明顯相關(guān)，B7-H4分子可以作為ccRCC患者早期診斷、病情評(píng)估以及預(yù)后判斷的分子生物學(xué)指標(biāo)；
　　2. IL-2、IFN-α、IFN-γ可以從mRNA