VEGF ASODN基因治療糖尿病視網(wǎng)膜病變的實驗研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：在糖尿病視網(wǎng)膜病變的動物模型上將 VEGF ASODN導入SD(Sprague Dawley)大鼠相應的眼球玻璃體內(nèi)轉(zhuǎn)染視網(wǎng)膜細胞，利用免疫組化分析其作用效果，以揭示VEGF ASODN下調(diào)視網(wǎng)膜VEGF表達、抑制新生血管形成。使用具有較高分子量的熒光素對SD大鼠視網(wǎng)膜進行左心室灌注造影，觀察VEGF ASODN對糖尿病視網(wǎng)膜病變大鼠新生血管通透性的抑制，減少新生血管滲出的作用。 方法： 1、設計二個互補于VEGF

2、 mRNA的反義片段，作用于VEGF第1、2外顯子連接區(qū)(ODN)。寡核苷酸(Oligodeoxynucleotides ODN)的堿基序列為：ASODN:5’-TCCAGGGACCACTTGGCATGGTGGA-3’。其合成由上海生工生物公司(廠商)負責。 選鼠齡2個月，體重200g健康雄性SD大鼠55只(南大醫(yī)學院實驗動物中心提供)。適應性喂養(yǎng)兩天后，取15只健康大鼠正常喂養(yǎng)，為非糖尿病視網(wǎng)膜病變大鼠(對照組C)，另外40只

3、大鼠，禁食12小時后以60mg/kg一次性腹腔注射2％STZ(Streptozotocin 鏈尿佐菌素)溶液，臨用前用0.5 mmol/L的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(pH 4.5)配制。注射后48 h采尾血測血糖及尿糖，將血糖濃度大于16.7 mmol/L、尿糖陽性的大鼠定為糖尿病模型，共30只，將糖尿病大鼠分別飼養(yǎng)3個月。實驗動物模型建立喂養(yǎng)3個月即給予隨機分2組(治療組A、對照組B，n=15)，將100umol/LVEGF ASODN

4、(0.1lul/10g體重大鼠)注射于治療組A動物相應的眼球玻璃體內(nèi)，轉(zhuǎn)染視網(wǎng)膜細胞。對照組B注射相等量的生理鹽水于眼球玻璃體內(nèi)。注射三天后重復上述處理一次，摘除眼球，對各組大鼠視網(wǎng)膜VEGF免疫組化染色進行比較。 2、分別在各組取5只大鼠進行心臟灌注高分子量的熒光素后，迅速摘除眼球并固定，在顯微鏡下游離視網(wǎng)膜并鋪片，在熒光顯微鏡中觀察視網(wǎng)膜血管的分布與形態(tài)。 結(jié)果： 1、注射VEGF ASODN治療組A的大鼠視

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