通過SD大鼠過敏性哮喘模型鑒定美洲大蠊肌球蛋白輕鏈的變應(yīng)原性.pdf

1、目的: 建立美洲大蠊粗浸液的過敏性哮喘SD大鼠模型。在過敏性哮喘SD大鼠模型上鑒定美洲大蠊肌球蛋白輕鏈的變應(yīng)原性。
　　方法：雌性SD大鼠共40只，隨機分為4組：PBS陰性對照組（A組）、卵清蛋白（Ovalumin, OVA）陽性對照致敏組（B組）、美洲大蠊肌球蛋白輕鏈致敏組（C組）、美洲大蠊粗浸液致敏組（D組），每組10只SD大鼠。B組分別于第0、7、14、21天經(jīng)皮下注射OVA與氫氧化鋁混合懸液致敏。C組采用重組美洲大蠊肌球蛋

2、白輕鏈蛋白與氫氧化鋁混合懸液經(jīng)皮下注射致敏。D組采用美洲大蠊粗浸液與氫氧化鋁混合懸液經(jīng)皮下注射致敏。A組采用0.01M、PH=7.4的PBS代替注射致敏原。每次注射完畢監(jiān)測10min行為變化，觀察其行為學(xué)改變。第22天分別采用相應(yīng)組的注射液改用霧化吸入進行激發(fā)致敏，每天霧化吸入1次，每次30min，連續(xù)7天，末次激發(fā)致敏24小時后進行麻醉，心臟取血，ELISA檢測血清總IgE（T-IgE）、IL-4水平含量。灌注固定取肺組織，進行HE染

3、色觀察肺組織變化，冰上取材（肺組織），Western-bloting檢測IL-5、IFN-γ水平變化，支氣管灌洗（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）作為細胞計數(shù)檢測方法。免疫組織化學(xué)檢測B淋巴細胞瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/ leukemia-2，Bcl-2)，肺組織嗜酸性粒細胞（Eosnophils，EOS）的表達量。采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行分析，所有數(shù)據(jù)結(jié)果以（x±s）表

4、示，多組資料之間比較，采用單因素方差分析（one-Way ANOVA），當P<0.05具有統(tǒng)計學(xué)意義。采用GraphPad Prism5進行各種統(tǒng)計圖的制作。Western-bloting數(shù)據(jù)采用Quantity One軟件進行分析，免疫組化采用Image-Pro Plus6.0軟件進行分析。
　　結(jié)果：SD大鼠過敏性哮喘模型建立：B、D組分別與A組相比較，1、行為學(xué)評分檢測SD大鼠的活動能力顯著降低(P<0.01)。2、支氣管灌

5、洗細胞數(shù)量增加(P<0.01)。3、血清中T-IgE濃度、IL-4濃度均顯著升高（P<0.01）。4、HE染色的肺組織B、D組氣道壁粘膜、粘膜下、肺間質(zhì)和小血管周圍可見大量的炎性細胞浸潤，肺間質(zhì)及肺泡腔內(nèi)可見嗜酸性粒細胞，粘膜明顯充血水腫，氣道粘膜層及粘膜下層明顯增厚，杯狀細胞增生，上皮細胞壞死和脫落，氣道內(nèi)有粘液栓及脫落的粘膜上皮，支氣管粘膜皺襞增多卷曲，管腔狹窄。美洲大蠊肌球蛋白輕鏈的變應(yīng)原性鑒定：C組與A組相比較，1、行為學(xué)評分大

6、于5分，SD大鼠活動能力顯著降低(P<0.01)。2、支氣管灌洗細胞數(shù)量顯著增多（P<0.01)。3、肺組織HE染色可見大量杯狀細胞增生，氣道內(nèi)有粘液栓及脫落的粘膜上皮，支氣管粘膜皺襞增多卷曲，管腔狹窄，肺間質(zhì)及肺泡腔內(nèi)可見嗜酸性粒細胞。4、血清中T-IgE濃度、IL-4濃度均顯著升高（P<0.01）。5、肺組織Bcl-2表達均為顯著升高（P<0.01)。5、Western-bloting檢測肺組織勻漿液中IL-5、IFN-γ水平，其中