體外法評(píng)定反芻動(dòng)物可利用真蛋白消化率的研究.pdf

1、本試驗(yàn)采用了胃蛋白酶、胃蛋白酶-胰酶制劑和胃蛋白酶-SIF三種體外法來(lái)測(cè)定12種綿羊的典型混合日糧的可利用真蛋白的消化率，將3種方法的結(jié)果進(jìn)行比較，以胃蛋白酶-SIF為標(biāo)準(zhǔn)，探求3種方法之間的相關(guān)性，找出可以替代胃蛋白酶-SIF法來(lái)評(píng)定uTP在反芻動(dòng)物后消化道的消化率的體外法。 本試驗(yàn)第一部分選用3頭體重28.17±0.73kg帶有瘤胃瘺管的健康成年雜交綿羊(小尾寒羊×北京本地羊)作為瘤胃液供體，供體外培養(yǎng)的日糧參照NRC(19

2、75)成年綿羊飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)(體重45kg，日增重250g)，配制出12種典型綿羊日糧。采用Zhao(2000)提供的方法進(jìn)行短期人工瘤胃發(fā)酵，制備出人工瘤胃食糜，比較了經(jīng)瘤胃發(fā)酵后12種混合日糧中TP和DM的變化。第二部分采用3種體外法評(píng)定人工瘤胃食糜中uTP的消化率，胃蛋白酶體外培養(yǎng)參照Tilley和Terry(1963)的方法進(jìn)行，選取了24h、48h和72h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，分析比較了這三個(gè)時(shí)間點(diǎn)之間的相關(guān)關(guān)系；胃蛋白酶-胰酶制劑和胃蛋白酶

3、-SIF體外培養(yǎng)以Akeson等(1964)的方法為基礎(chǔ)，篩選了符合本實(shí)驗(yàn)室的最佳培養(yǎng)條件，最后分析比較了三種方法之間的相關(guān)關(guān)系。 試驗(yàn)結(jié)果表明：(1)經(jīng)瘤胃液培養(yǎng)發(fā)酵后，12種混合日糧的DM含量顯著降低，而蛋白含量少、品質(zhì)較差的日糧經(jīng)發(fā)酵后真蛋白含量顯著提高。(2)胃蛋白酶體外培養(yǎng)的條件：每0.5g樣品加入40m10.1M鹽酸溶液(20g/L胃蛋白酶)，在38℃水浴搖床中培養(yǎng)24、48、72h后取出，在1800xg下離心30m

4、in；胃蛋白酶一胰酶制劑體外培養(yǎng)條件：每0.5g樣品用胃蛋白酶培養(yǎng)3個(gè)小時(shí)后，加入1M氫氧化鈉溶液中和，在1800xg下離心30min，加入10ml胰酶制劑溶液(0.2MKH<,2>PO<,4>-0.2MNa<,2>HPO<,4> PH=7.6，4mg/ml胰酶制劑Sigma，P.7545)培養(yǎng)24h，取出后在2400xg下離心15min；胃蛋白酶-sif的培養(yǎng)條件同胃蛋白酶-胰酶制劑，SIF用量為每0.5g樣品用0.09g SIF。(

5、3)三種方法經(jīng)相關(guān)分析后，發(fā)現(xiàn)胃蛋白酶三個(gè)時(shí)間點(diǎn)之間呈顯著相關(guān)關(guān)系，回歸公式如下：胃蛋白酶24h(x)和胃蛋白酶48h(y)：y=1.03x-8.83(R<'2>=0.85，n=12，p<0.01) 胃蛋白酶48h(x)和胃蛋白酶72h(y)：y=0.96x+0.86(R<'2>=0.96，n=12，p<0.01) 胃蛋白酶24h(x)和胃蛋白酶72h(y)：y=0.98x-7.23(R<'2>=0.81，n=12，p<0.01)但是，