膠原酶門靜脈灌注逆轉(zhuǎn)兔CCl4肝硬化.pdf

1、研究背景和目的：肝硬化(1iver cirrhosis)是一個(gè)病理形態(tài)學(xué)概念，是臨床常見的肝臟疾患，可由肝膽系本身的疾病和某些全身性病變所引起，是慢性肝臟病變的終末期。肝硬化是我國(guó)的常見疾病，也是臨床死亡的重要病因之一，肝纖維化(1iverfibrosis)是指纖維組織在肝臟的沉積。纖維化的產(chǎn)生主要依靠肝臟細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)在數(shù)量和質(zhì)量上的轉(zhuǎn)換，故ECM的降解和吸收是抗纖維化的重要對(duì)策。促進(jìn)ECM降解的主要方法是提高金屬蛋白酶系(ma

2、trix metalloproteinases，MMPs)的表達(dá)和抑制其特異性抑制物—金屬蛋白酶組織抑制因子(TIMPs)的水平。目前用于緩解肝纖維化的治療模型主要有：①病因?qū)W治療，包括治療原發(fā)疾病或減輕疤痕組織產(chǎn)生前的炎癥反應(yīng)；②通過(guò)減少激活的肝臟星形細(xì)胞的數(shù)量或降低其功能來(lái)減少肝實(shí)質(zhì)內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生；⑨降解肝實(shí)質(zhì)內(nèi)沉積的疤痕組織。其主要目的是增加肝臟細(xì)胞外基質(zhì)的降解或減少肝臟細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生。對(duì)于已經(jīng)形成的肝硬化，增加肝臟細(xì)胞外基

3、質(zhì)的降解是更為合理的選擇，但肝臟內(nèi)源性膠原酶誘導(dǎo)的活性和數(shù)量都難以把握，使肝纖維化的逆轉(zhuǎn)效果難以保證。本課題研究補(bǔ)充外源性的膠原酶，降解肝內(nèi)過(guò)多的細(xì)胞外基質(zhì)：逆轉(zhuǎn)肝纖維化和肝硬化。四氧化碳(CCl4)是一種肝臟毒性物質(zhì)，長(zhǎng)期反復(fù)給藥可以導(dǎo)致肝臟的慢性損傷，CCl4中毒性肝纖維化動(dòng)物模型是經(jīng)典的造模方法。本課題選用新西蘭大白兔皮下注射CCl4形成肝硬化模型，通過(guò)門靜脈灌注膠原酶，觀察膠原酶逆轉(zhuǎn)肝硬化的療效及對(duì)肝腎功能的影響。
　　

4、 研究方法：
　　 1．雄性新西蘭大白兔隨機(jī)分組，采血查肝腎功，記錄體重。
　　 2．制備CCl4肝硬化模型，及建立門靜脈灌注膠原酶的給藥系統(tǒng)，探索CCl4及膠原酶的有效劑量。
　　 3．使用羥脯氨酸純品建立羥脯氨酸測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
　　 4．肝硬化模型及門脈給藥系統(tǒng)建立后采血查肝腎功，取肝組織測(cè)羥脯氨酸含量及制作病理切片。
　　 5．治療結(jié)束后采血查肝腎功，處死動(dòng)物取肝組織測(cè)羥脯氨酸含量，取肝制

5、作病理切片。
　　 結(jié)果
　　 1．四氯化碳注射12周后，兔肝組織出現(xiàn)典型的假小葉，肝功能受損，門靜脈給藥系統(tǒng)可在體內(nèi)維持，在膠原酶安全劑量下兔不良反應(yīng)發(fā)生率低。
　　 2．經(jīng)過(guò)膠原酶門靜脈灌注后，肝組織學(xué)檢查顯示膠原酶治療后肝硬化可消退。
　　 3．肝硬化組：用膠原酶灌注治療的肝羥脯氨酸含量顯著低于用生理鹽水灌注的對(duì)照組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；正常組：用膠原酶灌注治療的肝臟羥脯氨酸含量略低于用生理鹽水灌注的對(duì)照