肺動脈高壓兒童BMPR2基因突變的研究.pdf

1、骨形成蛋白Ⅱ型受體(BMPR2)是家族性肺動脈高壓(FPAH)和特發(fā)性肺動脈高壓(IPAH)的重要致病因素。國外研究報道家族性、特發(fā)性肺動脈高壓及先天性心臟病肺動脈高壓患者(CHD/PAH)存在BMPR2基因突變。其中，家族性肺動脈高壓BMPR2基因突變類型有140余種。我國先天性心臟病合并肺動脈高壓患兒是否也存在BMPR2基因外顯子突變及國內家族性肺動脈高壓患兒是否存在BMPR2基因新的突變位點，罕見報道，為此，本研究旨在探討先天性心

2、臟病合并肺動脈高壓患兒和家族性肺動脈高壓患兒是否存在BMPR2基因突變。
　　 第一部分:先天性心臟病合并肺動脈高壓患兒BMPR2基因新突變
　　 目的:探討先天性心臟病合并肺動脈高壓患兒是否存在BMPR2基因突變。
　　 研究對象和方法:
　　 1.研究對象:本研究收集自2011年2月至2011年8月在山東省立醫(yī)院小兒心臟科及心外科住院的66例先天性心臟病合并肺動脈高壓的患兒作為病例組，包括室間隔缺損2

3、5例、房間隔缺損5例、動脈導管未閉16例、復雜先天性心臟病20例。其中男39例，女27例，年齡在29天～18歲之間。66名種族、性別、年齡相匹配的健康兒童作為對照組。所有病例和對照均行超聲心動圖檢測，且病例組中有19例經心導管檢測證實。
　　 2.方法:
　　 (1)采集66例無血緣關系的先天性心臟病合并肺動脈高壓的患兒和66名健康兒童外周靜脈血，提取基因組DNA，PCR方法擴增BMPR2基因的1-13個外顯子編碼序列后

4、，對擴增產物純化后進行測序，測序峰圖用Sequencher4.7Demo軟件進行分析，與GeneBank人BMPR2的基因序列進行比對。
　　 (2)BMPR2基因多態(tài)性分析:通過x2檢驗比較BMPR2基因多態(tài)位點等位基因及其基因型在病例組與對照組間頻率分布有無統計學意義。
　　 結果:
　　 (1)在66例先天性心臟病合并肺動脈高壓患兒中檢測出1例部分性房室隔缺損并二尖瓣前葉裂、肺動脈高壓患兒BMPR2基因外顯

5、子8發(fā)生錯義突變，而其余的病例和對照者均未發(fā)現相同的位點發(fā)生堿基突變。
　　 (2)BMPR2基因外顯子8發(fā)生錯義突變的患兒為女性，3歲4個月，活動后口唇紫紺1年半;心臟聽診為胸骨左緣2、3肋間可聞及3/6級噴射樣收縮期雜音，P2亢進、固定分裂;胸片示心影增大呈梨形，主動脈結縮小，肺動脈段突出;超聲心動圖檢查顯示左房內徑2.65cm，右房（橫徑）3.61cm，右室內徑2.48cm，主肺動脈內徑2.55cm，房室間隔缺損、二尖瓣前

6、葉裂并大量反流，肺動脈收縮壓力為38mmHg，診斷為部分性房室隔缺損并二尖瓣前葉裂、肺動脈高壓。
　　 (3)在66例先天性心臟病合并肺動脈高壓患兒中發(fā)現9名患兒和10名健康兒童BMPR2基因編碼區(qū)有一個單核苷酸多態(tài)位點，即c.2811G＞A，經統計學分析，此多態(tài)位點在兩組之間差異無統計學意義。
　　 結論:
　　 1.1例部分性房室隔缺損并二尖瓣前葉裂、肺動脈高壓患兒BMPR2基因外顯子8發(fā)生錯義突變(p.Va

7、l348Ile，c.1042G＞A)，提示BMPR2基因突變可能和先天性心臟病與肺動脈高壓形成有關。本研究為國內首次對先天性心臟病合并肺動脈高壓患兒進行BMPR2基因突變篩查，且發(fā)現存在BMPR2基因突變，該突變位點為一新的突變位點。
　　 2.9名先天性心臟病合并肺動脈高壓患兒和10名健康兒童BMPR2基因編碼區(qū)均發(fā)現有一單核苷酸多態(tài)位點(c.2811G＞A)，此多態(tài)位點可能與先天性心臟病、肺動脈高壓形成無關。
　　

8、第二部分:家族性肺動脈高壓兒童BMPR2基因新突變
　　 目的:探討中國漢族家族性肺動脈高壓患兒是否存在BMPR2基因突變。
　　 研究對象和方法:
　　 1.研究對象:本研究收集2011年8月在山東省立醫(yī)院小兒心臟科住院的一個家族性肺動脈高壓家系，家系中成員共8人，男5例，女3例，其中患者1人。先證者經實驗室檢查、心電圖、胸片及胸部CT以排除引起繼發(fā)性肺動脈高壓的疾病。先證者家系成員經體檢、心電圖、胸片及超聲心

9、動圖檢查，均未見異常。87名健康兒童作為對照組。
　　 2.方法
　　 采集家系中8名成員和87名健康兒童外周靜脈血，提取基因組DNA，用PCR方法擴增BMPR2基因13個外顯子編碼序列后，對擴增產物純化后進行測序，和GeneBank人的BMPR2基因序列進行比對。
　　 結果:
　　 1.BMPR2基因C347R錯義突變可能是與家族性肺動脈高壓發(fā)生有關的一個新突變位點。
　　 2.先證者的外祖父

10、及其母親的BMPR2基因第8外顯子的第347位密碼子發(fā)生T→C的置換，使半胱氨酸變?yōu)榫彼幔磒.Cys347Arg，二者無肺動脈高壓的臨床表型。
　　 3.家系其他的成員和對照組BMPR2基因1-13號外顯子基因測序結果均未發(fā)現異常改變。
　　 4.先證者，男，3歲8月，活動后乏力2月;口唇紫紺，眼瞼浮腫，頸靜脈怒張，心尖搏動彌散，可觸及抬舉樣搏動。心音低鈍，可聞及奔馬律，P2亢進。肝肋下4cm，劍下4cm，質韌，雙下

11、肢輕度凹陷性水腫。胸片示肺動脈段突出，右房大。胸部CT示肺動脈主干及左右肺動脈增粗，橫徑約2cm，右心室增大，心包內可見少量液體密度。超聲心動圖示右心房內徑3.37cm，右心室內經2.88cm，右室后壁0.38cm，主肺動脈內徑2.46cm，三尖瓣環(huán)擴張，并探及中度反流信號，估測肺動脈收縮壓86mmHg，臨床診斷為原發(fā)性肺動脈高壓（重度），右心功能衰竭，心功能Ⅳ級。
　　 結論:BMPR2基因C347R錯義突變可能是與家族性肺動