子宮內(nèi)膜異位癥患者卵泡液對(duì)小鼠卵子發(fā)育與受精的影響及卵泡液中ENA-78的變化.pdf

1、背景:子宮內(nèi)膜異位癥是一種具有惡性腫瘤行為的良性疾病，可以引起盆腔疼痛、月經(jīng)異常及不孕等癥狀。育齡期婦女中患病率約為25％，其中30％～50％合并不孕。一直以來(lái)，子宮內(nèi)膜異位癥及其不孕的治療效果均不十分理想，這與其發(fā)病機(jī)制及不孕機(jī)制不甚明確有關(guān)。近三十年來(lái)，科研工作者及臨床醫(yī)生對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥做了大量的研究，尚未能完全闡明其相關(guān)機(jī)制。輔助生殖技術(shù)的廣泛開(kāi)展，不但為子宮內(nèi)膜異位癥合并不孕患者提供了良好的治療方法，同時(shí)也為從不同角度及環(huán)節(jié)研

2、究子宮內(nèi)膜異位癥導(dǎo)致不孕的機(jī)制提供了可能。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為子宮內(nèi)膜異位癥合并不孕患者與輸卵管因素不孕患者相比，其體外受精-胚胎移植的成功率較低，這與子宮內(nèi)膜異位癥對(duì)精卵受精能力、胚胎質(zhì)量及種植環(huán)境的影響均有一定關(guān)系。為使體外受精－胚胎移植成功率進(jìn)一步提高，從各個(gè)層面探討子宮內(nèi)膜異位癥造成不孕的機(jī)制尤為重要。 目的:觀察子宮內(nèi)膜異位癥患者卵泡液對(duì)小鼠成熟卵子體外受精及未成熟卵子體外成熟與受精的影響，探討子宮內(nèi)膜異位癥造成不孕的機(jī)制；檢

3、測(cè)子宮內(nèi)膜異位癥患者卵泡液ENA－78水平，了解子宮內(nèi)膜異位癥患者卵泡液微環(huán)境變化。 方法: 一、子宮內(nèi)膜異位癥患者卵泡液對(duì)小鼠成熟卵母細(xì)胞體外受精的影響 1、昆明白雌性小鼠經(jīng)HMG促排卵，44～48小時(shí)后注射HCG，15～17小時(shí)脫頸法處死小鼠，取出輸卵管，解剖顯微鏡下收集輸卵管內(nèi)成熟卵母細(xì)胞。將收集到的卵母細(xì)胞隨機(jī)分為三組進(jìn)行體外受精：空白對(duì)照組：DMEM液+10％胎牛血清+50IU/ml青霉素+50μg/m

4、l鏈霉素；研究組：DMEM液+10％胎牛血清+50IU/ml青霉素+50μg/ml鏈霉素+40％子宮內(nèi)膜異位癥患者卵泡液；對(duì)照組：DMEM液+10％胎牛血清+50IU/ml青霉素+50μg/ml鏈霉素+40％輸卵管因素不孕患者卵泡液。 2、統(tǒng)計(jì)三組卵母細(xì)胞受精率。 二、子宮內(nèi)膜異位癥患者卵泡液對(duì)小鼠未成熟卵子體外成熟及受精的影響 1、昆明白雌性小鼠經(jīng)HMG促排卵，44～48小時(shí)后脫頸法處死小鼠，取出卵巢，解剖顯微

5、鏡下收集未成熟的卵母細(xì)胞。將收集到的卵母細(xì)胞隨機(jī)分為三組進(jìn)行體外成熟培養(yǎng)：空白對(duì)照組：DMEM液+10％胎牛血清+1IU/mlFSH+0．5IU/mlLH+0．5IU/mlHCG+50IU/ml青霉素+50μg/ml鏈霉素；研究組：DMEM液+10％胎牛血清+1IU/mlFSH+0．5IU/mlLH+0．5IU/mlHCG+50IU/ml青霉素+50μg/ml鏈霉素+40％子宮內(nèi)膜異位癥患者卵泡液；對(duì)照組：DMEM液+10％胎牛血清+1

6、IU/mlFSH+0．5IU/mlLH+0．5IU/mlHCG+50IU/ml青霉素+50μg/ml鏈霉素+40％輸卵管因素患者卵泡液。取卵當(dāng)天及培養(yǎng)后24h、36h、48h、54h在倒置顯微鏡下觀察三組卵母細(xì)胞的分期及成熟情況。排出第一極體（PBI）的卵母細(xì)胞判為MⅡ期（核成熟）。 2、對(duì)三組體外成熟的MⅡ期卵母細(xì)胞進(jìn)行體外受精。精子來(lái)源為昆明白雄性小鼠，體外受精液：DMEM液+10％胎牛血清+50IU/ML青霉素+50μg/

7、ml鏈霉素。 3、統(tǒng)計(jì)三組卵母細(xì)胞體外成熟率及體外受精率。 三、子宮內(nèi)膜異位癥患者卵泡液中上皮中性粒細(xì)胞活化肽-78（ENA-78）水平的變化 1、腹腔鏡、開(kāi)腹手術(shù)或卵巢囊腫穿刺證實(shí)為子宮內(nèi)膜異位癥患者及腹腔鏡或開(kāi)腹手術(shù)確診為輸卵管性不孕患者，采用黃體期降調(diào)節(jié)長(zhǎng)方案進(jìn)行促排卵，取卵時(shí)收集第一管無(wú)血液污染卵泡液，卵泡液經(jīng)1000×g離心10分鐘，取上清液，-20℃保存。 2、ELSIA試劑盒對(duì)收集的卵泡液進(jìn)

8、行檢測(cè)。 結(jié)果: 一、子宮內(nèi)膜異位癥患者卵泡液對(duì)小鼠成熟卵母細(xì)胞體外受精的影響 體內(nèi)成熟小鼠卵母細(xì)胞在三種不同成份體外受精液中進(jìn)行體外受精，研究組、對(duì)照組及空白對(duì)照組體外受精率分別為68．28％，74％，78．5％。三組體外受精情況比較，無(wú)顯著性差異。 二、子宮內(nèi)膜異位癥患者卵泡液對(duì)小鼠未成熟卵母細(xì)胞體外成熟及受精的影響 1、不同期別卵母細(xì)胞體外成熟情況： GV期小鼠卵母細(xì)胞研究組、對(duì)照

9、組及空白對(duì)照組體外成熟率分別為25．81％，34．18％，38．38％，研究組成熟率明顯低于對(duì)照組及空白對(duì)照組，對(duì)照組與空白對(duì)照組比較無(wú)明顯差異；MⅠ期小鼠卵母細(xì)胞三組體外成熟率分別為46．33％，58．02％，62．83％，研究組成熟率明顯低于對(duì)照組及空白對(duì)照組，對(duì)照組與空白對(duì)照組比較無(wú)明顯差異；每組GV期與MⅠ期比較，MⅠ期體外成熟率均高于GV期，有顯著性差異。 2、不同期別體外成熟卵母細(xì)胞體外受精情況 來(lái)自GV期體

10、外成熟的卵母細(xì)胞研究組、對(duì)照組及空白對(duì)照組體外受精率分別為41．67％，58．33％，58．77％，研究組受精率明顯低于對(duì)照組及空白對(duì)照組，對(duì)照組與空白對(duì)照組比較無(wú)明顯差異；來(lái)自MⅠ期體外成熟的卵母細(xì)胞三組體外受精率分別為57．43％，70．73％，73．33％，研究組受精率明顯低于對(duì)照組及空白對(duì)照組，對(duì)照組與空白對(duì)照組比較無(wú)明顯差異；每組GV期體外成熟的卵母細(xì)胞與MⅠ期體外成熟的卵母細(xì)胞比較，MⅠ期體外成熟的卵母細(xì)胞體外受精率均高于G

11、V期，有顯著性差異。 三、子宮內(nèi)膜異位癥患者卵泡液中ENA-78水平的變化 研究組患者卵泡液中ENA-78濃度平均為185．55±71．75 pg/ml，對(duì)照組患者卵泡液濃度平均為130．79±55．13pg/ml，兩組比較研究組患者卵泡液水平明顯高于對(duì)照組，有顯著性差異。 結(jié)論: 1．子宮內(nèi)膜異位癥患者卵泡液對(duì)小鼠體內(nèi)成熟卵母細(xì)胞受精能力無(wú)明顯影響； 2．子宮內(nèi)膜異位癥患者卵泡液不僅降低了小鼠未