肝癌及癌旁組織中HBX序列變異類型分析及其與臨床表型關(guān)系的探討.pdf

1、肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是全球范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一，每年的新增肝癌病例及肝癌致死數(shù)均約為70萬，其中約半數(shù)發(fā)生在中國。乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）持續(xù)感染是HCC發(fā)生的主要致病因素。HBV X基因(HBX)編碼的HBx蛋白具有多種生物學(xué)功能，參與病毒的復(fù)制，宿主基因表達(dá)的調(diào)控，細(xì)胞周期的調(diào)控，信號(hào)通路的激活等，并在HBV的有效感染以及HCC的發(fā)生和發(fā)展過程中

2、發(fā)揮重要的作用。由于HBV DNA聚合酶缺乏嚴(yán)格的校正機(jī)制，所以HBV在宿主細(xì)胞中的復(fù)制過程中存在較高的堿基錯(cuò)配率，導(dǎo)致HBX的突變頻率較高。HBV復(fù)制的這一特點(diǎn)，使得不同來源的HBX基因的序列并不完全相同。
　　在本項(xiàng)研究中，我們通過對(duì)較大樣本進(jìn)行HBX基因測(cè)序和數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，一方面，較為系統(tǒng)和全面地描述了在人肝癌組織和癌旁正常組織中HBX基因的序列特征，尋找疾病相關(guān)的點(diǎn)突變、缺失和插入等形式的序列改變，并結(jié)合病歷資料對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行

3、進(jìn)一步的分析。
　　我們共對(duì)287例HCC患者肝癌組織和205例癌旁正常組織進(jìn)行基因組DNA的抽提和HBX基因的擴(kuò)增，并對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序檢測(cè)。其中，經(jīng)過對(duì)HCC癌組織和癌旁正常組織中PCR獲得的HBX基因進(jìn)行序列的測(cè)定。在HCC肝癌組織中HBX基因PCR陽性率為66.90％(192/287)，癌旁正常組織中PCR陽性率為72.68％(149/205)。通過DNA測(cè)序，在肝癌組織中我們得到了169條HBX的序列，其中包含40.2

4、4％(68/169)的截短序列和8.88％（15/169）的存在堿基插入的序列，在癌旁組織中獲得117條HBX序列，其中包含20.51％(24/117)的截短序列和7.69％(9/117)的存在堿基插入的序列，我們對(duì)所得序列進(jìn)行整理分析后發(fā)現(xiàn)，癌和癌旁中的序列均存在三種類型的突變形式，截短突變（包括N-端和C-端突變），插入突變和點(diǎn)突變。
　　我們結(jié)合病歷資料分別對(duì)這三種情況在癌和癌旁中的差異進(jìn)行了討論，發(fā)現(xiàn)癌組織中的C-端截短突

5、變數(shù)顯著高于癌旁組織(x2=4.23，P=0.040)，且在有肝硬化的患者的癌中分布顯著高于癌旁組織(x2=4.59，P=0.032);插入突變?cè)诎┖桶┡灾械臋z出率差別不大，插入的類型較多，但均未見文獻(xiàn)報(bào)道，且插入突變只在血清AFP水平高于20(ng/ml)的分組中檢出（x2=10.12，P=0.006）;點(diǎn)突變率很高，且突變情況復(fù)雜，并未發(fā)現(xiàn)單個(gè)核苷酸或氨基酸位點(diǎn)的突變?cè)诎┖桶┡灾胁町愶@著，但是在男性分組的患者中，我們發(fā)現(xiàn)在男性患者中

6、發(fā)現(xiàn)43、47、127、131、132位氨基酸種類的改變?cè)谀行园┖桶┡灾胁町愶@著，且多涉及氨基酸的親疏水性變化。進(jìn)一步對(duì)氨基酸的親疏水性進(jìn)行對(duì)比分析，發(fā)現(xiàn)40、43、47、127、130、132位氨基酸親疏水性的變化在男性癌和癌旁中差異顯著。且40位點(diǎn)氨基酸的親疏水性的改變?cè)谌堪┖桶┡孕蛄兄写嬖陲@著差異（x2=5.04，P=0.033）。
　　且47位點(diǎn)在TNM臨床Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期病人癌組織中氨基酸親疏水性的分布存在顯著差異(x2=

7、7.00，P=0.030)，疏水性氨基酸的比例隨著TNM臨床分期級(jí)數(shù)的增加而逐漸增加，同樣，位于HBx C-端的127位點(diǎn)的氨基酸種類(x2=12.64，P=0.002)和氨基酸親疏水性(x2=13.60，P=0.001)變化在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期病人的癌組織中分布均有顯著差異，疏水性氨基酸的比例隨著TNM臨床分期級(jí)數(shù)的增加而逐漸減少。132位點(diǎn)氨基酸種類變化(phe/tyr)在肝癌不同分化程度的男性病人組織中的分布存在顯著差異，且疏水性氨基酸