生育三烯酚誘導結腸癌細胞死亡的死亡方式及機制研究.pdf

1、分類號：R114密級：學位類別：科學學位團專業(yè)學位口◇學校代碼；10062學號：2010602147學科門類：醫(yī)學又坪暑科^號碩士學位論文MASTER’SDISSERTATIoN論文題目：生育三烯酚誘導結腸癌細胞死亡的死亡方式及機制研究TITLEMannerandmechanismofdeathtocotrienolinducedoncoloncancercells一級學科：公共衛(wèi)生與預防醫(yī)學二級學科：衛(wèi)生毒理學論文作者：馬躍指導教師：

2、王風山研究員導師組成員：張靜姝副研究員天津醫(yī)科大學研究生院二。一三年五月天津醫(yī)科大學碩士學位論文中文摘要目的本研究旨在通過體外培養(yǎng)人結腸癌SW620細胞、HCT8細胞，利用分子生物學實驗技術，通過多個角度證實生育三烯酚誘導結腸癌細胞死亡的死亡方式為paraptosis樣死亡，并以paraptosis樣死亡方式為中心，探討生育三烯酚誘導結腸癌細胞發(fā)生的機制。方法1生育三烯酚誘導人結腸癌細胞死亡的方式研究體外培養(yǎng)人結腸癌細胞，加入不同劑量的

3、6一生育三烯酚(1、25、5、10、15、20、25、30和401xmol／L)和乙醇(溶劑對照)作用24h后，以MTT實驗觀察6一生育三烯酚對SW620細胞存活率的影響；按照5、10、15、20“mol／L6一生育三烯酚作用于細胞，以熒光染色(AO／EB染色，DAPI染色)觀察細胞死亡情況。按照20pmol／L棄lJ量加入6一生育三烯酚，通過JJ口Zparaptosis抑制劑放線菌酮觀察其對生育三烯酚作用的影響情況，來正面證實生育三烯

4、酚誘導人結腸癌細胞死亡的方式中存在paraptosis樣死亡。以不同劑量的6生育三烯酚作用于人結腸癌細胞SW620中，檢測細胞中caspase一3的活性，并用抗癌陽性藥物紫杉醇作為腫瘤細胞凋亡誘導劑作用于SW620細胞中，利用DNALadder方法檢測細胞中DNA的降解情況，從而證實生育三烯酚誘導人結腸癌細胞死亡并非典型凋亡方式。利用免疫細胞化學檢測細胞中細胞自噬標記蛋白LC3的表達情況來觀察生育三烯酚誘導人結腸癌細胞產生的這種空泡化死

5、亡現(xiàn)象與細胞自噬的關系，從而排除細胞自噬的可能，從反面證實生育三烯酚誘導人結腸癌細胞死亡的方式為paraptosis樣死亡。為了排除細胞系的特異性，本實驗中增加了另一種人結腸癌細胞系，HCT8細胞。將v一生育三烯酚作用于HCT8細胞，觀察細胞死亡情況，同時檢測細胞中caspase3的活性，作為細胞系平行實驗。26生育三烯酚誘導人結腸癌細胞SW620死亡的機制研究體外培養(yǎng)SW620細胞，加入的20LLmol／L6一生育三烯酚作用24h后，