高血壓患者腸系膜動(dòng)脈平滑肌AngⅡ受體mRNA表達(dá)變化的研究.pdf

1、目的：高血壓（hypertension，HT）是危害人類健康的心血管常見病、多發(fā)病，也是一系列心腦血管疾?。ㄈ缰酗L(fēng)、冠心病、糖尿病）的主要危險(xiǎn)因素。深入理解高血壓發(fā)生、發(fā)展中的分子機(jī)制，對(duì)于預(yù)防、治療高血壓有重要意義。高血壓主要表現(xiàn)為動(dòng)脈血管張力增加，阻力動(dòng)脈的張力持續(xù)增加是高血壓的基本病理特征，而血管平滑肌細(xì)胞（vascular smooth muscle cell，VSMC）離子通道的活動(dòng)是血管張力調(diào)節(jié)的主要因素，在高血壓中的變化值

2、得探討。研究發(fā)現(xiàn)，大電導(dǎo)鈣激活鉀通道（large conduction calcium—activated potassium channels，BKCa）是血管平滑肌分布最豐富、單通道電導(dǎo)最大（100～300pS）的鉀離子通道，在血管張力調(diào)節(jié)中起負(fù)反饋調(diào)節(jié)作用，它的功能或密度的改變可能是高血壓的發(fā)病機(jī)制之一。AngⅡ（angiotensinⅡ）作為一種內(nèi)源性的縮血管活性物質(zhì)，通過血管緊張素1型受體（angiotensin recept

3、or1，AT1R）發(fā)揮其縮血管的作用。然而，近年來的研究發(fā)現(xiàn)，AngⅡ還可以作用于血管緊張素2型受體（angiotensin receptor2，AT2R）舒張?zhí)囟ǖ难埽涫鎻堁艿臋C(jī)制正是通過激活BKCa發(fā)揮作用的，因此，探討高血壓發(fā)病的離子通道機(jī)制中AT1R和AT2R的變化以及由此引起的BKca的變化是需要研究的。本課題采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)正常血壓和高血壓患者腸系膜動(dòng)脈平滑肌AngⅡ受體基因表達(dá)進(jìn)行對(duì)比研究，為進(jìn)一步探討原

4、發(fā)性高血壓發(fā)生發(fā)展過程中可能的離子通道功能變化，為高血壓發(fā)病機(jī)制的闡明提供更多的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：①24例接受腹部手術(shù)的患者分為兩組：原發(fā)性高血壓（HT組）15例（其中未服抗高血壓藥的3例，服抗高血壓藥的12例）、正常血壓（NT組）9例，取其切除的腸系膜動(dòng)脈作為研究對(duì)象；②提取腸系膜動(dòng)脈總RNA，通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT—PCR）構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)準(zhǔn)曲線；③以GAPDH為內(nèi)參照基因，采用SYBR GreenⅠ法實(shí)時(shí)熒光定量PCR

5、技術(shù)檢測(cè)高血壓患者和正常血壓患者腸系膜動(dòng)脈平滑肌AngⅡ受體基因mRNA水平； 結(jié)果：①總RNA質(zhì)量：提取的總RNA通過紫外分光光度儀測(cè)量，A260/A280在1．80—2．10之間，A260/A230在1．90—2．20之間，濃度大于100ng/ul，通過1%瓊脂糖凝膠電泳得出，28S帶和18S帶明顯，灰度比大于1，5S帶不明顯，無拖尾；②標(biāo)準(zhǔn)曲線和熔解曲線：標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)R2>0．99，AT1R基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線

6、為y=—0．29x+9．22，R2=0．995； AT2R基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=—0．30x+7．76，R2=0．997； GAPDH基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=—0．27x+5．45，R2=0．996。熔解曲線呈明顯單峰狀，退火溫度與預(yù)測(cè)值基本一致；③AT1R基因NT組mRNA表達(dá)的Ct值為4．1727±0．6084，HT未服藥組及服藥組的mRNA表達(dá)的Ct值分別為4．4513±0．5676，4．8074±0．8598，AT1R的mRNA原始拷

7、貝數(shù)在NT組和HT組的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。AT2R基因在NT組mRNA表達(dá)的Ct值為7．686±0．6195，HT未服藥組及服藥組的mRNA表達(dá)的Ct值分別為9．104±0．4240，7．6203±0．5548，AT2R的mRNA原始拷貝數(shù)在HT未服藥組為NT組的0．3926倍，服藥組為NT組的1．0567倍，AT2R在NT組和HT未服藥組的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）；在NT組和HT服藥組的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：與正常組