槲皮素對結(jié)腸癌LOVO細(xì)胞的增殖、侵襲及癌胚抗原CEA表達(dá)的影響.pdf

1、背景和目的:
　　TGF-β(Transforming growth factorβ，TGF-β)信號通路在細(xì)胞生物學(xué)功能方面有著重要作用，它的功能失常常導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。TGF-β信號通路是通過調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲轉(zhuǎn)移、免疫及細(xì)胞間微環(huán)境來促進(jìn)腫瘤的惡性發(fā)展。結(jié)腸癌標(biāo)志物癌胚抗原CEA(Carcinoembryonic antigen，CEA)作為細(xì)胞間的粘附分子，在多種腫瘤中出現(xiàn)過表達(dá)，具有潛在增強腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移能力的作用。C

2、EA的表達(dá)量對腫瘤預(yù)后的評估和腫瘤療效的監(jiān)測及評估有著重要的價值。研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β信號通路不僅具有調(diào)節(jié)腫瘤增殖、侵襲能力的功能，還具有刺激結(jié)腸腫瘤過量分泌表達(dá)CEA的作用。槲皮素(Quercetin)是一類天然類黃酮物質(zhì)，廣泛存在于各類蔬菜水果，比如茶葉、蘋果、洋蔥及趕黃草等，具有抗炎、抗氧化和擴張血管等功能。在歐美等國家，槲皮素已經(jīng)被推薦為天然的潛力抗癌藥物。本實驗致力于通過一種新的治療性藥物槲皮素來抑制結(jié)腸癌LOVO細(xì)胞的增殖、

3、侵襲能力及CEA的表達(dá)的研究，為更好地理解TGF-β信號通路在腫瘤中的作用和槲皮素的潛在抗結(jié)腸癌作用提供理論基礎(chǔ)。
　　方法:
　　一、槲皮素(Quercetin)通過TGF-β1/smad3/c-myc信號通路抑制LOVO細(xì)胞增殖
　　1、實驗以5ng/ml的TGF-β1誘導(dǎo)刺激1周的LOVO細(xì)胞為細(xì)胞模型，共分四組:對照組（C組）、TGF-β1組（T組）、TGF-β1+Quercetin組（TQ組）、Quercet

4、in組（Q組）。C組為正常的LOVO細(xì)胞;T組為用5ng/ml的TGF-β1刺激細(xì)胞1周的LOVO細(xì)胞;TQ組為以5ng/ml的TGF-β1刺激細(xì)胞1周后，再使用20umol/L Quercetin處理的LOVO細(xì)胞;Q組為只使用20umol/L Quercetin處理的LOVO細(xì)胞。
　　2、采用MTT法、平板克隆等檢測方法分析槲皮素和TGF-β1對LOVO細(xì)胞增殖能力、克隆形成能力。
　　3、采用免疫組化、逆轉(zhuǎn)錄PCR、

5、免疫印跡法等檢測方法分析槲皮素和TGF-β1對LOVO細(xì)胞smad3及c-myc基因表達(dá)的影響。
　　二、槲皮素對結(jié)腸癌LOVO細(xì)胞侵襲能力及癌胚抗原CEA表達(dá)的影響
　　1、實驗分兩組:對照組和槲皮素組。對照組為正常LOVO細(xì)胞;槲皮素組為以不同藥物濃度處理的LOVO細(xì)胞。
　　2、采用內(nèi)皮細(xì)胞粘附實驗和小室侵襲實驗檢測槲皮素對LOVO細(xì)胞侵襲能力的影響。
　　3、采用細(xì)胞免疫熒光、逆轉(zhuǎn)錄PCR及免疫印跡法檢測

6、槲皮素對LOVO細(xì)胞癌胚抗原CEA表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:
　　一、槲皮素通過TGF-β1/smad3/c-myc信號通路抑制LOVO細(xì)胞增殖
　　1、與對照組相比，T組LOVO細(xì)胞增殖能力、smad3及c-myc的表達(dá)強于對照組(P＜0.05);Q組和TQ組LOVO細(xì)胞增殖能力、smad3及c-myc的表達(dá)較對照組減弱（P＜0.05）。
　　2、TQ組與Q組相比較，TQ組增殖能力和c-myc的表達(dá)弱于Q組（P＜

7、0.05），而smad3的表達(dá)兩組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　二、槲皮素對結(jié)腸癌LOVO細(xì)胞侵襲能力及癌胚抗原CEA表達(dá)的影響
　　1、與對照組相比，槲皮素組的LOVO細(xì)胞粘附能力增強和侵襲能力減弱（P＜0.05）。
　　2、與對照組相比，槲皮素組的LOVO細(xì)胞的癌胚抗原CEA mRNA表達(dá)水平和蛋白表達(dá)水平減弱（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1、TGF-β1能促進(jìn)LOVO細(xì)胞增殖、sma