乳酸桿菌發(fā)酵濾液中核酸抗腫瘤效應(yīng)及對(duì)荷瘤鼠免疫功能的影響.pdf

1、目的：乳酸桿菌是人體正常菌群的重要組成成員之一，大量的研究和實(shí)踐證明其具有顯著的提高機(jī)體免疫力，保持宿主健康的功能。通過(guò)流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，長(zhǎng)期食用經(jīng)乳酸桿菌發(fā)酵的酸奶制品可降低乳腺癌、結(jié)直腸癌、胃癌及膀胱癌的發(fā)生率，但其抗腫瘤分子機(jī)制還不十分清楚。我們發(fā)現(xiàn)乳酸桿菌DM9811對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期發(fā)酵濾液中存在大量的核酸組分。已有報(bào)道乳酸桿菌基因組AT核苷酸可以通過(guò)增強(qiáng)TH1型免疫反應(yīng)來(lái)上調(diào)機(jī)體抗腫瘤免疫水平。乳酸桿菌發(fā)酵濾液中核酸組分的性質(zhì)、來(lái)源

2、、是否在抗腫瘤效應(yīng)中起到重要作用值得進(jìn)行研究。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)乳酸桿菌DM9811發(fā)酵濾液中核酸組分進(jìn)行定量、定性分析，觀察其在體外對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的影響及對(duì)荷瘤鼠免疫功能的影響，研究該核酸組分是否具有抗腫瘤效應(yīng)，從而探討其可能的分子作用機(jī)制及該核酸組分成為新一代抗腫瘤活性物質(zhì)的可能性。 方法：1.乳酸桿菌DM9811發(fā)酵濾液中核酸的提取、定性、定量。將菌液用0.45um濾器過(guò)濾，酚/氯仿抽提，無(wú)水乙醇沉淀后溶于去RNA酶水；260n

3、m比色，觀察其OD值與細(xì)菌菌數(shù)的關(guān)系；瓊脂糖電泳分析濾液中核酸和乳酸桿菌胞內(nèi)核酸，對(duì)RNA酶消化前后電泳條帶進(jìn)行對(duì)比。2.體外觀察濾液中核酸對(duì)結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞系的抑制效應(yīng)。調(diào)結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞濃度為1×106，MTT法觀察抽提的核酸組分濃度分別為10ug/ml、50ug/ml、100u/gml時(shí)對(duì)結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞系生長(zhǎng)的影響。3.體內(nèi)觀察濾液中核酸對(duì)荷瘤鼠免疫功能的影響。純系615小鼠分為預(yù)防組、治療組和陰性對(duì)照組，陰性對(duì)照組

4、腹腔注射0.1ml生理鹽水；預(yù)防組隔日注射核酸10ug/0.1ml·只-1，共五次，于末次注射24小時(shí)后右前腋下接種小鼠腹水型肝癌細(xì)胞株106/0.1ml·只-1；治療組荷瘤48小時(shí)后開(kāi)始隔日注射核酸10ug/0.1ml·只-1，五次后處死小鼠，觀察不同組別小鼠生存期、瘤重體重比、NK細(xì)胞活性、T淋巴細(xì)胞亞群指標(biāo)的差異。 結(jié)果：1.乳酸桿菌DM9811發(fā)酵濾液中核酸組分為RNA，其片段大小為100bp-200bp。對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期期間

5、濾液中RNA含量隨時(shí)間的延長(zhǎng)而升高，與細(xì)菌菌數(shù)呈正相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.990(P＜0.05)。2.體外抑瘤實(shí)驗(yàn)：在細(xì)胞濃度為1×106時(shí)，RNA濃度100ug/ml能夠明顯抑制結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞系的生長(zhǎng)，抑制率為29.22±4.32﹪；50ug/ml、10ug/ml對(duì)結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞系的生長(zhǎng)沒(méi)有顯著的抑制作用。3.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：預(yù)防組荷瘤鼠除CD8+T細(xì)胞比例之外各項(xiàng)指標(biāo)與陰性對(duì)照組相比都有顯著性差異(P＜0.05)，其中NK細(xì)胞

6、殺傷活性(58.97±3.62)、CD4+T細(xì)胞比例(27.77±5.40)和生存期(15.1±4.48)均高于陰性對(duì)照組(43.87±3.92)、(19.68±3.00)、(10.2±3.08)，瘤重體重比(0.029±0.017)低于陰性對(duì)照組(0.066±0.024)；治療組除生存期以外的其他指標(biāo)與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異，生存期(11.8±3.12)與陰性對(duì)照組(10.2±3.08)相比有顯著性差異(P＜0.05)，治療組生存期長(zhǎng)