乳酸桿菌發(fā)酵濾液中核酸抗腫瘤效應(yīng)及對荷瘤鼠免疫功能的影響.pdf

1、目的：乳酸桿菌是人體正常菌群的重要組成成員之一，大量的研究和實踐證明其具有顯著的提高機體免疫力，保持宿主健康的功能。通過流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，長期食用經(jīng)乳酸桿菌發(fā)酵的酸奶制品可降低乳腺癌、結(jié)直腸癌、胃癌及膀胱癌的發(fā)生率，但其抗腫瘤分子機制還不十分清楚。我們發(fā)現(xiàn)乳酸桿菌DM9811對數(shù)生長期發(fā)酵濾液中存在大量的核酸組分。已有報道乳酸桿菌基因組AT核苷酸可以通過增強TH1型免疫反應(yīng)來上調(diào)機體抗腫瘤免疫水平。乳酸桿菌發(fā)酵濾液中核酸組分的性質(zhì)、來源

2、、是否在抗腫瘤效應(yīng)中起到重要作用值得進行研究。本實驗通過對乳酸桿菌DM9811發(fā)酵濾液中核酸組分進行定量、定性分析，觀察其在體外對腫瘤細(xì)胞生長的影響及對荷瘤鼠免疫功能的影響，研究該核酸組分是否具有抗腫瘤效應(yīng)，從而探討其可能的分子作用機制及該核酸組分成為新一代抗腫瘤活性物質(zhì)的可能性。 方法：1.乳酸桿菌DM9811發(fā)酵濾液中核酸的提取、定性、定量。將菌液用0.45um濾器過濾，酚/氯仿抽提，無水乙醇沉淀后溶于去RNA酶水；260n

3、m比色，觀察其OD值與細(xì)菌菌數(shù)的關(guān)系；瓊脂糖電泳分析濾液中核酸和乳酸桿菌胞內(nèi)核酸，對RNA酶消化前后電泳條帶進行對比。2.體外觀察濾液中核酸對結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞系的抑制效應(yīng)。調(diào)結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞濃度為1×106，MTT法觀察抽提的核酸組分濃度分別為10ug/ml、50ug/ml、100u/gml時對結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞系生長的影響。3.體內(nèi)觀察濾液中核酸對荷瘤鼠免疫功能的影響。純系615小鼠分為預(yù)防組、治療組和陰性對照組，陰性對照組

4、腹腔注射0.1ml生理鹽水；預(yù)防組隔日注射核酸10ug/0.1ml·只-1，共五次，于末次注射24小時后右前腋下接種小鼠腹水型肝癌細(xì)胞株106/0.1ml·只-1；治療組荷瘤48小時后開始隔日注射核酸10ug/0.1ml·只-1，五次后處死小鼠，觀察不同組別小鼠生存期、瘤重體重比、NK細(xì)胞活性、T淋巴細(xì)胞亞群指標(biāo)的差異。 結(jié)果：1.乳酸桿菌DM9811發(fā)酵濾液中核酸組分為RNA，其片段大小為100bp-200bp。對數(shù)生長期期間

5、濾液中RNA含量隨時間的延長而升高，與細(xì)菌菌數(shù)呈正相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.990(P＜0.05)。2.體外抑瘤實驗：在細(xì)胞濃度為1×106時，RNA濃度100ug/ml能夠明顯抑制結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞系的生長，抑制率為29.22±4.32﹪；50ug/ml、10ug/ml對結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞系的生長沒有顯著的抑制作用。3.體內(nèi)實驗：預(yù)防組荷瘤鼠除CD8+T細(xì)胞比例之外各項指標(biāo)與陰性對照組相比都有顯著性差異(P＜0.05)，其中NK細(xì)胞

6、殺傷活性(58.97±3.62)、CD4+T細(xì)胞比例(27.77±5.40)和生存期(15.1±4.48)均高于陰性對照組(43.87±3.92)、(19.68±3.00)、(10.2±3.08)，瘤重體重比(0.029±0.017)低于陰性對照組(0.066±0.024)；治療組除生存期以外的其他指標(biāo)與對照組相比無顯著性差異，生存期(11.8±3.12)與陰性對照組(10.2±3.08)相比有顯著性差異(P＜0.05)，治療組生存期長