全局轉錄工程選育耐乳酸鼠李糖乳酸桿菌.pdf

1、乳酸及其衍生物被廣泛應用于食品、醫(yī)藥、輕工業(yè)、農業(yè)等領域。生產光學純L-乳酸的鼠李糖乳酸桿菌因其在調節(jié)腸道菌群等方面的功效受到廣泛關注,然而有關鼠李糖乳酸桿菌的基因工程菌種選育的報道并不多見,因而穩(wěn)定的遺傳轉化體系的建立是必要的,同時在乳酸菌發(fā)酵過程中有很明顯的產物抑制效應,限制了乳酸產業(yè)的發(fā)展。
　　本研究采用全局轉錄機器工程(gTME),通過易錯PCR在σ70因子的表達框中引入突變,構建重組載體并導入受體菌株獲得轉錄突變庫,通

2、過壓力篩選獲得耐乳酸鼠李糖乳酸桿菌。
　　(1)建立了鼠李糖乳酸桿菌的基因工程操作體系。質粒提取時最優(yōu)溶菌酶處理條件為:30mg/ml、37℃處理30min。電轉化條件為:使用2％甘氨酸進行預弱化一次,OD600為0.2~0.3時加入氨芐青霉素使終濃度達到12μg/mL,收集OD600為0.4的細胞制備感受態(tài)細胞,電場強度為8.5kv/cm,電擊時間4ms。
　　(2)通過恒化器培養(yǎng)篩選法、液體壓力沖擊法和壓力平板篩選法三種