鹿血晶對荷瘤鼠放療后免疫功能的影響.pdf

1、目的:
　　迄今為止，惡性腫瘤仍舊是影響人類生命健康和生活質量的一類嚴重疾病，是人類疾病中的第二大殺手，手術、化療、放療是其治療的三大基本手段。多數(shù)腫瘤要依靠放射治療，但放療缺乏對正常細胞和腫瘤細胞的選擇性，射線在殺死腫瘤細胞的同時，對于正常細胞也存在殺傷作用，從而產生毒副作用，使得其存在極大的局限性，最為常見也最為關鍵的就是導致機體免疫力下降，嚴重影響患者的治療效果和生存質量。因此，在腫瘤治療的過程中，殺死腫瘤細胞和保護機體免疫

2、系統(tǒng)同等重要。中國傳統(tǒng)醫(yī)藥雖在控制腫瘤方面欠佳，但多數(shù)具有增強免疫、降低毒副作用的功效，且較為安全，在放療輔助治療上具備獨特的優(yōu)勢。鹿血晶系梅花鹿血或馬鹿血經炮制加工干燥后制得的產品，具有養(yǎng)血益精、行血祛瘀、消腫療傷等作用。本文旨在通過觀察外周血象、脾臟和骨髓組織形態(tài)、T細胞亞群及相關蛋白等的變化，評價鹿血晶對荷瘤鼠放療后免疫功能的影響，并初步探討其可能機制，為臨床用藥提供依據(jù)。
　　方法：
　　1.制備S180腹水瘤細胞懸

3、液，建立S180荷瘤鼠模型。
　　2.分組和給藥。設置正常組、荷瘤模型組、放療組、放療+鹿血晶組。對治療組進行X線局部照射，10 Gy/5次，2 Gy/次，每天1次，連續(xù)5天。放療+鹿血晶組自照射開始即灌胃給予鹿血晶混懸液，連續(xù)給藥10天，于開始給藥后第16天處死。
　　3.在治療期間觀察小鼠的一般情況和腫瘤生長情況，并定期檢測小鼠外周血血象，觀察各組小鼠在治療期間血象的變化。
　　4.治療結束后將小鼠處死，鈍性剝離脾

4、臟和同側股骨制作標本，稱取脾重，計算脾臟指數(shù)；制備抗凝血，采用流式細胞術檢測各組小鼠外周血的T淋巴細胞亞群CD3+T淋巴細胞、CD4+T淋巴細胞、CD8+T淋巴細胞。
　　5.采用酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）雙抗體夾心法檢測各組小鼠外周血血清中細胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-1表達水平。
　　6.采用免疫組化法檢測各組小鼠脾臟組織中轉錄因子GATA3和T-bet的表達。
　　7.采用HE染色技

5、術，觀察各組小鼠脾臟和骨髓的組織形態(tài)變化。
　　結果：
　　1.荷瘤鼠接受照射后體重呈下降趨勢，給藥后體重下降幅度減小，腫瘤增長也較放療組減緩。
　　2.治療期間外周血血象檢測結果表明，與模型組相比，開始照射后5天，放療組的白細胞、淋巴細胞、紅細胞數(shù)均降低，給鹿血晶后白細胞數(shù)、淋巴細胞數(shù)有回升趨勢，其中與模型組相比，各治療組淋巴細胞數(shù)變化顯著（P<0.05）；尤其第10天，與模型組相比，放療組和放療+鹿血晶組的白細胞數(shù)

6、、淋巴細胞數(shù)均顯著下降（P<0.01），且第10天和第15天荷瘤鼠放療+鹿血晶組的淋巴細胞數(shù)較放療組明顯升高（P<0.05）。
　　3.對脾臟指數(shù)的影響：與模型組相比，放療組的脾臟指數(shù)有所降低，但無統(tǒng)計學意義。與放療組比較，鹿血晶對放療荷瘤鼠放療后脾臟指數(shù)的升高作用明顯（P<0.01）。
　　4.外周血 T細胞亞群檢測結果表明，與模型組相比，放療后荷瘤鼠 CD4+輔助性 T細胞亞群、CD8+殺傷性 T細胞亞群以及 CD4+/

7、CD8+的比例均下降（P<0.05）；與放療組相比，鹿血晶對荷瘤鼠放療后外周血中 CD4+輔助性 T細胞亞群的數(shù)量有增強作用，CD4+/CD8+比例也增加（P<0.01）。
　　5.外周血細胞因子檢測結果表明，荷瘤鼠放療后外周血的 IFN-γ表達減少（P<0.05），給藥后較放療組荷瘤鼠外周血IFN-γ水平升高（P<0.05）；放療荷瘤鼠外周血的IL-4表達水平上升（P<0.05），與放療組荷瘤鼠相比，給藥后荷瘤鼠外周血IL-4表

8、達降低（P<0.05）。放療組較模型組荷瘤鼠外周血的IL-6、IL-1表達均有增加趨勢，給藥后呈下降趨勢，但差異未見統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　6.免疫組化法檢測各組小鼠脾臟組織中轉錄因子GATA3與T-bet表達，結果表明，與模型組相比，放療組和放療+鹿血晶組T-bet和GATA3表達均降低，放療組T-bet表達比GATA3降幅更大，GATA3表達占優(yōu)勢，給藥后GATA3表達明顯降低（P<0.01），T-bet表達上升。說

9、明鹿血晶能緩解放療造成的荷瘤鼠脾臟組織中T-bet/GATA3的比值降低，使T-bet表達占優(yōu)勢。
　　7.病理組織學檢測結果表明，給藥后放療組荷瘤鼠的脾臟、骨髓組織形態(tài)學損傷減輕。
　　結論：
　　鹿血晶對放療引起的荷瘤鼠血象損傷尤其是T淋巴細胞損傷具有一定的保護作用，能夠緩解放療引起的體重減輕以及脾臟、造血功能損傷，并能通過調節(jié)CD4+/CD8+T細胞比例、平衡Th1/Th2型細胞因子，增強細胞免疫功能。部分機制可