替米沙坦對(duì)非酒精性脂肪性肝炎模型大鼠肝纖維化的影響.pdf

1、非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）包括單純性脂肪性肝病、非酒精性脂肪性肝炎（nonalcoholic steatohepatitis，NASH）、脂肪性肝纖維化和脂肪性肝硬化。其中NASH是NAFLD進(jìn)展的重要中間階段，也是隱源性肝硬化的重要病因。NAFLD是一種病變主要在肝小葉，以肝細(xì)胞脂肪變性和脂肪過(guò)多貯積為病理特征但無(wú)過(guò)量飲酒史的臨床綜合征。NAFLD最常見(jiàn)病因?yàn)榉逝?/p>

2、、2型糖尿病和高脂血癥。NAFLD的患病率逐年上升，已成為全球普遍關(guān)注的醫(yī)學(xué)問(wèn)題和社會(huì)問(wèn)題。
　　 NASH以竇周纖維化為特征，由活化的肝星狀細(xì)胞介導(dǎo)。血管緊張素-Ⅱ（AngiotensinⅡ，ATⅡ）已被報(bào)導(dǎo)在組織器官纖維化的發(fā)生機(jī)制上起重要的作用，并且研究了它在器官纖維化中的作用。一些研究已證實(shí)AT1受體阻制劑（ARB）可明顯改善實(shí)驗(yàn)性肝纖維化通過(guò)抑制肝星狀細(xì)胞活化和肝臟TGF-β1的表達(dá)。最近，替米沙坦，一種新型的ARB，

3、被發(fā)現(xiàn)除了阻制AT1受體外，它還是PPARγ的部分激動(dòng)劑，具有改善糖脂代謝，阻止體重增加，促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化的作用。故我們探討替米沙坦對(duì)NASH大鼠肝纖維化的影響，為NASH提供一種新的治療方法。
　　 目的：建立非酒精性脂肪性肝炎模型，觀察替米沙坦對(duì)NASH大鼠體重、血清轉(zhuǎn)氨酶、血脂、胰島素抵抗以及對(duì)肝臟病理、纖維化的影響。探討替米沙坦防治NASH的作用機(jī)制。
　　 方法：選取雄性（Sprague Dawley）SD大鼠

4、35只正常喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)分成3組：正常對(duì)照組（NC group.n=10）喂飼普通飼料16周；高脂對(duì)照組（FC group，n=15），喂飼高脂飼料（88％普通飼料+2％膽固醇+10％豬油）；高脂加替米沙坦干預(yù)組（FT group，n=10），喂飼高脂飼料。12周末時(shí)隨機(jī)取FC組5只做肝組織的HE染色，確定造模成功。然后干預(yù)組給予替米沙坦干預(yù)（5mg/kg.d）并繼續(xù)高脂飲食，而正常及模型對(duì)照組則以等容量鹽水灌服，均每日一次，持續(xù)4周

5、。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自由飲水進(jìn)食。16周后處死大鼠，電子天平稱(chēng)取體重，肝濕重，計(jì)算肝指數(shù)：肝濕重/體重×100％；取肝右葉約1cm×1cm×0.5cm組織固定于4％多聚甲醛，常規(guī)石蠟切片，Masson染色明確有無(wú)纖維化，HE染色光鏡下觀察組織脂肪變程度及炎癥分級(jí)；測(cè)定血清甘油三酯（TG）、膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門(mén)冬酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）。測(cè)空腹血糖（FBG），空腹血清胰島素（FINS），由

6、公式HOMA-IR=（FPG×FINS）/22.5計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)。用免疫組織化學(xué)法測(cè)定各組肝組織中α-SMA的表達(dá)。用半定量的逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測(cè)各組大鼠肝臟TIMP-1、MMP-2和TGF-β1的mRNA表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：
　　 1各組大鼠體重、肝濕重及肝指數(shù)的變化情況：16周末成功復(fù)制大鼠NASH模型。模型組大鼠的體重（609.56±37.29）、肝重（25.40±4.71）及肝指數(shù)（4

7、.29±0.49％）均明顯高于正常對(duì)照組的體重（516.29±37.77）、肝重（13.03±2.74）及肝指數(shù)（2.72±0.57％）（P值均<0.01），有顯著性差異。與模型組相比。治療組體重（558.15±46.12）、肝重（18.19±2.73）及肝指數(shù)（3.79±0.57％）均明顯降低（P<0.01，0.01，0.05），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2肝組織病理學(xué)：正常組大鼠肝細(xì)胞無(wú)脂肪變性，均無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；模型組大鼠出現(xiàn)

8、彌漫性肝細(xì)胞脂肪變性，以中央靜脈周?chē)顬槊黠@，可見(jiàn)程度不等的小葉內(nèi)炎癥、匯管區(qū)炎癥，并有點(diǎn)灶狀壞死，甚至部分壞死融合成片，與正常組相比有顯著性差異（P值<0.01）。治療組肝細(xì)胞脂肪變性較模型組明顯改善（P<0.01）；治療組炎癥分級(jí)較模型組明顯降低（P<0.01）。造模組12周大鼠肝臟Masson染色未見(jiàn)肝組織纖維化，但造模組16周出現(xiàn)中央靜脈周?chē)⒏]周纖維組織增生及纖維條索。治療組肝臟Masson染色未見(jiàn)纖維化，有顯著性差異（P<0

9、.01）。
　　 3血清生化指標(biāo)：（1）血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和門(mén)冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）：模型組AIT（114.00±19.75）較正常組（48.20±10.99）顯著增高（P值<0.01），而治療組ALT為（78.80±15.64）較模型組顯著下降（P值<0.01），但與正常組仍有差異（P值<0.01）。模型組AST為（265.33±52.16）較正常組（153.00±45.06）顯著增高（P值<0.01），而治療組AST

10、為（211.83±65.51），較模型組下降，但無(wú)明顯差異（P>0.05）。（2）血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）和高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）：模型組血清 TC、 TG分別為（2.65±0.77，0.53±0.27）較正常組（1.44±0.24，0.29±0.14）顯著升高（P<0.01，0.05），治療組TC、TG分別為（2.22±0.55，0.39±0.18）較模型組下降（P>0.05），但無(wú)明顯差異；模型組HDL-C（

11、0.30±0.09）較正常組（0.46±0.05）顯著下降（P值<0.01）.，而治療組HDL-C（0.31±0.11），較模型組有所上升，但無(wú)明顯差異（P>0.05）。
　　 4胰島素抵抗變化及血糖情況：模型組空腹血糖、胰島素及胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）分別為（6.58±0.86，20.73±0.91，6.23±0.19）與正常對(duì)照組相比（4.58±1.00，10.48±1.46，2.13±0.29）明顯升高（P值均<0

12、.01），治療組空腹血糖、胰島素及胰島素抵抗指數(shù)分別為（5.38±0.88，15.02±1.22，3.59±0.29）較模型組明顯下降，有顯著性差異（P值均<0.01）。
　　 5免疫組織化學(xué)法：正常組大鼠肝臟中α-SMA僅于血管壁平滑肌細(xì)胞胞漿少量表達(dá)，而模型組大鼠肝臟α-SMA表達(dá)除在血管壁平滑肌細(xì)胞胞漿外，在肝組織中也見(jiàn)有陽(yáng)性表達(dá)，與正常組比較，有顯著性差異（P<0.01）。治療組表達(dá)較模型組明顯減少（P<0.01），有統(tǒng)

13、計(jì)學(xué)意義。
　　 6 TIMP-1，MMP-2和TGF-β1 mRNA表達(dá)：（1）TIMP-1mRNA變化：與正常組mRNA0.32±0.03相比，模型組0.93±0.08顯著增加（P<0.01），治療組0.77±0.07明顯低于模型組（P值<0.05）。（2）MMP-2mRNA變化：正常組mRNA為0.47±0.05；與正常組相比，模型組0.88±0.09顯著增加（P<0.01）；治療組0.69±0.07較模型組明顯降低（P<

14、0.01）。（3）TGF-β1mRNA變化：與正常組mRNA0.12±0.01相比，模型組0.36±0.04顯著增加（P<0.01）；治療組0.26±0.03明顯低于模型組（P值<0.01）。
　　 結(jié)論：
　　 高脂飼料飲食16周可成功誘導(dǎo)大鼠NASH形成。替米沙坦能改善糖脂代謝及胰島素抵抗并降低體重，可減輕肝臟脂肪變性及抗肝纖維化作用。其分子機(jī)制可能與其激活PPARγ受體，抑制血管緊張素-Ⅱ1型受體有關(guān)。對(duì)NASH有