電針對(duì)大鼠非酒精性脂肪性肝炎的治療作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:隨著社會(huì)的發(fā)展及人民生活水平的不斷提高，非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis，NASH)發(fā)病逐漸增多。本課題采用國(guó)內(nèi)外公認(rèn)的經(jīng)典NASH動(dòng)物模型，結(jié)合已有的關(guān)于NASH的研究成果，用病理學(xué)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)等技術(shù)，探討NASH狀態(tài)下肝組織NF-κb和PPARrmRNA的表達(dá)情況，闡明電針治療NASH的作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用電針治療NASH提供科學(xué)依據(jù)。 方法:將48只SD大鼠稱重標(biāo)

2、記后按隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為2組：正常對(duì)照組12只；造模組36只。正常對(duì)照組采用普通飼料喂養(yǎng)；造模組采用高脂飼料喂養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)依據(jù)范建高經(jīng)典造模方法(標(biāo)準(zhǔn)飼料的基礎(chǔ)上加2％膽固醇、13％豬油)復(fù)制NASH動(dòng)物模型。12周后，從正常對(duì)照組隨機(jī)抽取2只，造模組隨機(jī)抽取6只，肝臟病理切片證實(shí)造模成功后，取剩余30只造模組大鼠稱重，再隨機(jī)分為模型組10只，電針組10只，藥物組10只。正常組不進(jìn)行電針和藥物治療，同前普通飼料喂養(yǎng)4周；模型對(duì)照組，不進(jìn)行電

3、針和藥物治療，同前高脂飼料喂養(yǎng)4周。針刺組取穴參照新世紀(jì)全國(guó)高等中醫(yī)藥院校規(guī)劃教材《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》大鼠針灸穴位定位方法及擬人比照法定位，選取雙側(cè)肝俞、足三里、豐隆、太沖，自第12周開始每天治療1次，連續(xù)6天后休息1天，共治療4周；藥物組，自第12周開始每天以西藥熊去氧膽酸(UDCA)250mg/kg.d的水溶液灌胃，繼前高脂飼料喂養(yǎng)4周。各組大鼠在實(shí)驗(yàn)第16周隔夜空腹以2％戊巴比妥鈉按2ml/kg量麻醉，經(jīng)下腔靜脈采血，迅速按常規(guī)分離血清

4、；摘取肝臟。觀察動(dòng)物體重、食欲、行為、狀態(tài)、毛發(fā)及死亡情況，計(jì)算肝指數(shù)(肝臟濕重/體重×100％)；采用Olympus Au560全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清ALT、AST、TG、TC、FFA、空腹血糖(fasting blood glucose，F(xiàn)BG)；放射免疫分析法測(cè)定TNF-α、空腹血清胰島素(fasting Insulin，F(xiàn)INS；計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR=FBGx FINS)/22.5)；肝組織勻漿生化測(cè)定MDA、S

5、OD；電泳遷移率改變分析(EMSA)檢測(cè)NF-KB活性；采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法(RT-PCR)檢測(cè)PPARrmRNA；將肝組織用4℃生理鹽水沖洗，在肝臟最大葉距邊緣5mm處取小塊肝組織，中性福爾馬林固定，石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡下觀察肝組織普通病理變化。另取1 mm<'3>肝組織，2.5％戊二醛及1％鋨酸雙固定，梯度酒精脫水，環(huán)氧樹脂包埋，超薄切片，HITACHI H7500透射電鏡下觀察肝細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化。 結(jié)果:

6、 1.成功復(fù)制大鼠NASH模型。與空白模型組相比，電針組大鼠肝指數(shù)明顯降低(P<0.05)，炎癥活動(dòng)程度皆有明顯改善(P<0.05)；血清ALT、AST明顯降低(P<0.05)。除正常對(duì)照組外各組大鼠肝組織均表現(xiàn)有不同程度的脂肪變性、炎癥、壞死。電針組肝組織脂肪變性及炎癥程度明顯減輕，肝組織形態(tài)結(jié)構(gòu)改善。 2.模型組血清TG、TC、FFA水平比正常組顯著增高(P<0.05)；模型組比電針組顯著增高(P<0.05)；電針組血清

7、TG、TC水平較之藥物組有下降趨勢(shì)，但二者比較無(wú)明顯差異(P>0.05)；藥物組血清FFA水平較之電針組有下降趨勢(shì)，但二者比較無(wú)明顯差異(P>0.05)。 3.模型組肝組織MDA含量顯著高于正常組(P<0.05)，SOD活性顯著低于正常組(P<0.05)；電針組與模型組比較，MDA含量顯著降低(P<0.05)，而SOD活性明顯升高(P<0.05)；電針組與藥物組比較，MDA含量有下降趨勢(shì)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；而SOD活

8、性有下降趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 4.模型組血清TNF-α水平比正常組顯著增高(P<0.05)；電針組血清TNF-α水平比模型組顯著降低(P<0.05)；電針組血清TNF-α水平與藥物組比較無(wú)明顯差異(P>0.05)。 5.模型組胰島素抵抗指數(shù)水平比正常組顯著增高(P<0.05)；模型組比電針組增高(P<0.05)；電針組與藥物組比較無(wú)明顯差異(P>0.05)。 6.模型組和藥物組的 NF-KB 活

9、性明顯高于正常對(duì)照組(P值均<0.01)和電針組(P值均<0.05)。模型組、電針組和藥物組大鼠肝組織P P A RrmRNA的表達(dá)均較正常對(duì)照組有不同程度的減弱(P值均<0.01)，模型組大鼠肝組織P P A RrmRNA的表達(dá)明顯低于電針組(P<0.01)。 結(jié)論:氧化應(yīng)激進(jìn)而引起脂質(zhì)過氧化和肝損傷，最終引起前炎癥細(xì)胞因子產(chǎn)生，啟動(dòng)肝臟炎癥反應(yīng)；在NASH狀態(tài)下NF-κB活性增強(qiáng)、PPAR rmRNA表達(dá)減弱，顯示了三者之間

10、的相關(guān)性。電針具有多靶位治療NASH的作用： ①電針能明顯降低NASH大鼠肝指數(shù)，改善肝組織脂肪變性、炎癥活動(dòng)程度及肝功能。 ②電針能降低血清脂質(zhì)水平、減輕FFA的肝臟毒性、改善肝臟對(duì)脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)、減輕肝臟炎癥反應(yīng)。 ③電針能夠提高肝組織抗氧化能力，減輕脂質(zhì)過氧化。 ④電針能降低TNF-α的表達(dá)，減少細(xì)胞因子相關(guān)性損害。 ⑤電針能改善NASH大鼠IR狀態(tài)。 ⑥電針能夠抑制NF-KB的活性