GnRH Ⅱ在子宮內(nèi)膜異位癥的表達(dá)及對(duì)離體間質(zhì)細(xì)胞凋亡影響的研究.pdf

1、目的：研究GnRHⅡ蛋白在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達(dá)及其對(duì)離體培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞凋亡的影響。 方法：選自2007年8月至2008年4月在中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院住院手術(shù)及病理證實(shí)，確診為子宮內(nèi)膜異位癥巧克力囊腫，取異位和在位子宮內(nèi)膜各30例作為實(shí)驗(yàn)組，另選同期非子宮內(nèi)膜異位癥患者的正常子宮內(nèi)膜組織40例作為對(duì)照組。采用免疫組化SP法檢測(cè)GnRHⅡ蛋白在異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜組織中的表達(dá)情況，比較分析其表達(dá)差異性。另取30例內(nèi)異癥

2、異位及在位內(nèi)膜組織進(jìn)行間質(zhì)細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、鑒定，并以不同濃度的GnRHⅢ（0、10-10M、10-8M、10-6M）作用于這些離體培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞，采用Hoechst染色和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)離體培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞凋亡的發(fā)生情況。 結(jié)果：（1）GnRHⅡ蛋白陽(yáng)性表達(dá)定位于在位、異位及正常子宮內(nèi)膜腺體及間質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞漿，呈淺黃色、黃色、棕黃色或棕褐色。（2）GnRHⅡ蛋白在EMs異位和在位內(nèi)膜及對(duì)照組正常內(nèi)膜的表達(dá)依次

3、增強(qiáng)，兩兩比較差異有顯著性（P<0.05）。（3）GnRHⅡ在EMs患者的在位子宮內(nèi)膜和異位內(nèi)膜中的表達(dá)，不管是在增生期還是在分泌期都低于非EMs的子宮內(nèi)膜（P<0.05），在正常內(nèi)膜中的表達(dá)分泌期強(qiáng)于增生期，差異有顯著性（P<0.05）；而EMs異位內(nèi)膜和在位內(nèi)膜的分泌期和增生期表達(dá)無(wú)差異（P>0.05）。（4）離體培養(yǎng)情況下，對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞給予不同濃度的GnRHⅡ（0、10-10M、10-8M、10-6M）干預(yù)后，采用

4、Hoechst染色對(duì)不同處理組細(xì)胞進(jìn)行了細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)的分析。結(jié)果顯示：不同濃度的GnRHⅡ?qū)﹄x體培養(yǎng)的在位和異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞可誘導(dǎo)凋亡發(fā)生，表現(xiàn)為核碎裂，核溶解，核固縮或凋亡小體。其凋亡率（％）分別為：（2.58±0.73，4.90±0.41），（8.72±1.59，12.30±2.13），（19.90±2.37，29.40±4.05），（36.10±2.36，52.30±5.42），兩兩比較，差異有顯著性（P<0.05），提示：

5、不同濃度的GnRHⅡ?qū)﹄x體培養(yǎng)的異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的凋亡率明顯高于在位（P<0.05），且呈劑量依賴性。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示：不同濃度的GnRHⅡ?qū)﹄x體培養(yǎng)的在位和異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞可誘導(dǎo)凋亡發(fā)生，其凋亡率（％）分別為：（2.31±0.26，5.40±0.39），（10.20±1.29，14.50±2.17），（25.70±3.22，36.20±4.64），（59.70±6.63，72.30±8.12），兩兩比較，差異有顯著性（P<0

6、.05），與Hoechst染色檢測(cè)的凋亡率一致。提示：不同濃度的GnRHⅡ?qū)﹄x體培養(yǎng)的異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞的促凋亡作用明顯強(qiáng)于在位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞（P<0.05），且呈劑量依賴性。 結(jié)論：（1）內(nèi)源性的GnRHⅡ蛋白的低表達(dá)可能與內(nèi)異癥的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。（2）GnRHⅡ蛋白在正常內(nèi)膜中的表達(dá)與月經(jīng)周期有關(guān)，而在EMs中無(wú)差異。（3）外源性的GnRHⅡ可能直接通過(guò)促進(jìn)離體培養(yǎng)的EMs間質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞凋亡而達(dá)到治療內(nèi)異癥的目的，為內(nèi)異癥的新藥開(kāi)