水通道蛋白在子宮內膜異位癥的表達及子宮內膜細胞遷徙中的作用.pdf

1、研究背景：
　　 子宮內膜異位癥是生育期女性的常見病，且近年來有上升趨勢；本病在病理上呈良性形態(tài)學表現，但具有類似惡性腫瘤的特性：種植、侵襲及遠處轉移，是當今嚴重威脅婦女健康的婦科主要疾病之一。異位子宮內膜的來源至今尚未闡明，目前主要學說有：子宮內膜種植學說、淋巴及靜脈播散學說、體腔上皮化生學說、誘導學說、遺傳學說、免疫調節(jié)學說、其他因素（包括環(huán)境因素、血管生成、凋亡減少等）。其中種植學說是被絕大多是學者接受的，但是在位子宮內膜

2、是如何種植到子宮腔以外的部位的目前尚不明確。子宮內膜異位癥是一個有侵襲能力的良性疾病，侵襲有三部曲：遷徙、粘附和血管形成。在子宮內膜異位癥中，關于在位內膜和異位內膜的粘附和血管形成的研究較多，目前尚無子宮內膜異位癥遷徙方面的研究。
　　 子宮內膜異位癥的發(fā)生是一個不斷進展的過程，如何預防疾病的復發(fā)已經成了一個國際性難題。這使得從疾病發(fā)生之初阻斷異位內膜的種植尤為關鍵。因此，揭示子宮內膜種植過程中子宮內膜細胞遷徙的分子機制對防治子

3、宮內膜異位癥的發(fā)生具有重要的意義。
　　 細胞遷徙是機體內重要的生理過程，它是由離子通道調控的，涉及到細胞肌動蛋白的動力和形態(tài)的快速改變、細胞粘附位點的重新分布。細胞內存在一套完整、嚴密的機制以調控細胞的遷徙。細胞的遷徙可以分解成三個步驟：細胞的前沿伸出偽足，肌動蛋白網收縮，引導細胞遷徙的方向；未聚合的激動蛋白隨偽足運動，形成新的肌動蛋白，偽足與底物結合產生新的粘附；尾部的胞體粘附分離，細胞向前移動；尾部的激動蛋白收縮，胞體向前

4、移動。細胞遷徙發(fā)生的原因與細胞體內滲透壓的改變有關。引起細胞體內滲透壓的改變需要大量水分子的參與。目前關于細胞遷徙與子宮內膜異位癥的發(fā)生的研究較少。
　　 長期以來普遍認為，細胞內外的水分子是以簡單的跨膜擴散方式透過脂質雙分子層。1988年，Agre等在鑒定人類Rh血型抗原時，偶然在紅細胞膜上發(fā)現了一種新的28ku跨膜蛋白。1991-1992年，Agre等又先后完成了該蛋白分子克隆和功能鑒定，并證實該蛋白具有明確的水轉運功能。隨

5、后，在許多動、植物及微生物中相繼發(fā)現類似的專一性運輸水的通道，統(tǒng)稱為水通道蛋白（aquaporin，AQP）。研究表明AQP家族有著廣泛的功能：促進水分子的快速被動運輸；調節(jié)細胞內外滲透壓的平衡；促進細胞遷徙；調節(jié)脂肪代謝；神經信號傳導等。在女性生殖器官中的子宮、卵巢、輸卵管部位，卵泡的排卵、月經的形成以及惡性腫瘤或具有惡性行為的良性婦科疾病的發(fā)生發(fā)展都涉及到液體的流動以及宮腔或卵泡腔容積的改變。
　　 在女性的在位子宮內膜細胞

6、上已經發(fā)現有AQP的表達，我院前期的研究發(fā)現，AQP1，2，8在在位子宮內膜上有表達，AQP5在卵巢癌上皮細胞上有表達；但迄今AQP在異位子宮內膜細胞上的研究尚未見相關報道。
　　 由于本院前期的研究已經證明AQP1，2，8在正常婦女的子宮內膜上有表達，尚無水通道蛋白在子宮內膜異位癥中的研究。本研究首先檢測子宮內膜異位癥患者的在位子宮內膜和異位子宮內膜的AQP1，2，5，8的表達情況，以探討水通道蛋白在子宮內膜異位癥的子宮內膜中

7、的表達定位；結果發(fā)現，AQP1在在位內膜和異位內膜的微血管上有表達，AQP2，5，8在在位內膜和異位內膜的腺細胞上均有表達。AQP1、2、4、5、8是選擇性運輸水分子的水通道蛋白，由于本院對AQP1在正常子宮內膜微血管、子宮內膜增殖癥以及子宮內膜癌中已有研究，文獻報道AQP2、8主要是在分泌細胞上表達，本研究發(fā)現，AQP2、5、8在有分泌功能的子宮內膜腺上皮細胞上有表達，目前尚無AQP5在分泌細胞上的研究。本研究首先檢測子宮內膜異位癥患

8、者的在位和異位內膜的AQP1，2，5，8的表達情況，以探討AQP1，2，5，8在異位子宮內膜中的定位；然后以AQP5為切入點，應用RNA干擾技術沉默AQP5基因，觀察干擾后子宮內膜腺細胞AQP5的表達及其干擾后細胞遷徙的改變；旨在闡明細胞遷徙與子宮內膜異位癥發(fā)生的關系，并尋找能阻斷子宮內膜遷徙的關鍵分子，為探索子宮內膜異位癥的防治提供實驗依據。
　　 第一章 AQP1，2，5，8蛋白在子宮內膜異位癥在位和異位內膜組織中的表達

9、r>　　 研究目的：
　　 分別檢測子宮內膜異位癥患者的在位內膜和異位內膜的AQP1，2，5，8的表達水平，初步探討水通道蛋白的表達與子宮內膜異位癥的發(fā)生、發(fā)展的關系。
　　 材料和方法：
　　 選取2004年10月至2007年9月在浙江大學醫(yī)學院附屬婦產科醫(yī)院病理科存檔的，因子宮內膜異位癥進行半根治手術或術中診刮的內膜，獲得符合條件的病例共70例。根據納入標準獲得70例患者的異位內膜及在位內膜的石蠟標本。實驗

10、組為異位子宮內膜，對照組為同一例患者的在位內膜，通過免疫組織化學的方法檢測AQP1，2，5，8蛋白的表達情況。
　　 結果：
　　 1.AQP1在在位內膜和異位內膜的微血管中有豐富表達，在間質細胞和腺細胞中無表達；在在位子宮內膜組中，AQP2，5，8蛋白的表達主要位于子宮內膜的腺上皮和腔上皮細胞；AQP2在間質中無表達，AQP8在間質中有少許表達，AQP5在間質中有較弱的表達；在異位子宮內膜中，AQP2，5，8的表達主要

11、在腺上皮和腔上皮細胞，在間質中的表達略高于在位內膜。2.在兩組中，AQP1，2，5，8的表達與月經周期有關，在增生早期的表達較弱，增生晚期和分泌期的表達較強。3.光密度分析AQP1在分泌期的異位內膜的表達高于在位內膜；半定量分析AQP2，5，8在在位內膜的表達顯著高于異位內膜上的表達（P=<0.001，P=0.004，P<0.001）；4.AQP1，2，5，8在在位內膜和異位內膜的表達在增生期和分泌期無顯著性差異。
　　 結論：