水通道蛋白在子宮內(nèi)膜異位癥的表達(dá)及子宮內(nèi)膜細(xì)胞遷徙中的作用.pdf

1、研究背景：
　　 子宮內(nèi)膜異位癥是生育期女性的常見病，且近年來有上升趨勢(shì)；本病在病理上呈良性形態(tài)學(xué)表現(xiàn)，但具有類似惡性腫瘤的特性：種植、侵襲及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，是當(dāng)今嚴(yán)重威脅婦女健康的婦科主要疾病之一。異位子宮內(nèi)膜的來源至今尚未闡明，目前主要學(xué)說有：子宮內(nèi)膜種植學(xué)說、淋巴及靜脈播散學(xué)說、體腔上皮化生學(xué)說、誘導(dǎo)學(xué)說、遺傳學(xué)說、免疫調(diào)節(jié)學(xué)說、其他因素（包括環(huán)境因素、血管生成、凋亡減少等）。其中種植學(xué)說是被絕大多是學(xué)者接受的，但是在位子宮內(nèi)膜

2、是如何種植到子宮腔以外的部位的目前尚不明確。子宮內(nèi)膜異位癥是一個(gè)有侵襲能力的良性疾病，侵襲有三部曲：遷徙、粘附和血管形成。在子宮內(nèi)膜異位癥中，關(guān)于在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜的粘附和血管形成的研究較多，目前尚無子宮內(nèi)膜異位癥遷徙方面的研究。
　　 子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生是一個(gè)不斷進(jìn)展的過程，如何預(yù)防疾病的復(fù)發(fā)已經(jīng)成了一個(gè)國(guó)際性難題。這使得從疾病發(fā)生之初阻斷異位內(nèi)膜的種植尤為關(guān)鍵。因此，揭示子宮內(nèi)膜種植過程中子宮內(nèi)膜細(xì)胞遷徙的分子機(jī)制對(duì)防治子

3、宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生具有重要的意義。
　　 細(xì)胞遷徙是機(jī)體內(nèi)重要的生理過程，它是由離子通道調(diào)控的，涉及到細(xì)胞肌動(dòng)蛋白的動(dòng)力和形態(tài)的快速改變、細(xì)胞粘附位點(diǎn)的重新分布。細(xì)胞內(nèi)存在一套完整、嚴(yán)密的機(jī)制以調(diào)控細(xì)胞的遷徙。細(xì)胞的遷徙可以分解成三個(gè)步驟：細(xì)胞的前沿伸出偽足，肌動(dòng)蛋白網(wǎng)收縮，引導(dǎo)細(xì)胞遷徙的方向；未聚合的激動(dòng)蛋白隨偽足運(yùn)動(dòng)，形成新的肌動(dòng)蛋白，偽足與底物結(jié)合產(chǎn)生新的粘附；尾部的胞體粘附分離，細(xì)胞向前移動(dòng)；尾部的激動(dòng)蛋白收縮，胞體向前

4、移動(dòng)。細(xì)胞遷徙發(fā)生的原因與細(xì)胞體內(nèi)滲透壓的改變有關(guān)。引起細(xì)胞體內(nèi)滲透壓的改變需要大量水分子的參與。目前關(guān)于細(xì)胞遷徙與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生的研究較少。
　　 長(zhǎng)期以來普遍認(rèn)為，細(xì)胞內(nèi)外的水分子是以簡(jiǎn)單的跨膜擴(kuò)散方式透過脂質(zhì)雙分子層。1988年，Agre等在鑒定人類Rh血型抗原時(shí)，偶然在紅細(xì)胞膜上發(fā)現(xiàn)了一種新的28ku跨膜蛋白。1991-1992年，Agre等又先后完成了該蛋白分子克隆和功能鑒定，并證實(shí)該蛋白具有明確的水轉(zhuǎn)運(yùn)功能。隨

5、后，在許多動(dòng)、植物及微生物中相繼發(fā)現(xiàn)類似的專一性運(yùn)輸水的通道，統(tǒng)稱為水通道蛋白（aquaporin，AQP）。研究表明AQP家族有著廣泛的功能：促進(jìn)水分子的快速被動(dòng)運(yùn)輸；調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)外滲透壓的平衡；促進(jìn)細(xì)胞遷徙；調(diào)節(jié)脂肪代謝；神經(jīng)信號(hào)傳導(dǎo)等。在女性生殖器官中的子宮、卵巢、輸卵管部位，卵泡的排卵、月經(jīng)的形成以及惡性腫瘤或具有惡性行為的良性婦科疾病的發(fā)生發(fā)展都涉及到液體的流動(dòng)以及宮腔或卵泡腔容積的改變。
　　 在女性的在位子宮內(nèi)膜細(xì)胞

6、上已經(jīng)發(fā)現(xiàn)有AQP的表達(dá)，我院前期的研究發(fā)現(xiàn)，AQP1，2，8在在位子宮內(nèi)膜上有表達(dá)，AQP5在卵巢癌上皮細(xì)胞上有表達(dá)；但迄今AQP在異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞上的研究尚未見相關(guān)報(bào)道。
　　 由于本院前期的研究已經(jīng)證明AQP1，2，8在正常婦女的子宮內(nèi)膜上有表達(dá)，尚無水通道蛋白在子宮內(nèi)膜異位癥中的研究。本研究首先檢測(cè)子宮內(nèi)膜異位癥患者的在位子宮內(nèi)膜和異位子宮內(nèi)膜的AQP1，2，5，8的表達(dá)情況，以探討水通道蛋白在子宮內(nèi)膜異位癥的子宮內(nèi)膜中

7、的表達(dá)定位；結(jié)果發(fā)現(xiàn)，AQP1在在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜的微血管上有表達(dá)，AQP2，5，8在在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜的腺細(xì)胞上均有表達(dá)。AQP1、2、4、5、8是選擇性運(yùn)輸水分子的水通道蛋白，由于本院對(duì)AQP1在正常子宮內(nèi)膜微血管、子宮內(nèi)膜增殖癥以及子宮內(nèi)膜癌中已有研究，文獻(xiàn)報(bào)道AQP2、8主要是在分泌細(xì)胞上表達(dá)，本研究發(fā)現(xiàn)，AQP2、5、8在有分泌功能的子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞上有表達(dá)，目前尚無AQP5在分泌細(xì)胞上的研究。本研究首先檢測(cè)子宮內(nèi)膜異位癥患

8、者的在位和異位內(nèi)膜的AQP1，2，5，8的表達(dá)情況，以探討AQP1，2，5，8在異位子宮內(nèi)膜中的定位；然后以AQP5為切入點(diǎn)，應(yīng)用RNA干擾技術(shù)沉默AQP5基因，觀察干擾后子宮內(nèi)膜腺細(xì)胞AQP5的表達(dá)及其干擾后細(xì)胞遷徙的改變；旨在闡明細(xì)胞遷徙與子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生的關(guān)系，并尋找能阻斷子宮內(nèi)膜遷徙的關(guān)鍵分子，為探索子宮內(nèi)膜異位癥的防治提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 第一章 AQP1，2，5，8蛋白在子宮內(nèi)膜異位癥在位和異位內(nèi)膜組織中的表達(dá)

9、r>　　 研究目的：
　　 分別檢測(cè)子宮內(nèi)膜異位癥患者的在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜的AQP1，2，5，8的表達(dá)水平，初步探討水通道蛋白的表達(dá)與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。
　　 材料和方法：
　　 選取2004年10月至2007年9月在浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院病理科存檔的，因子宮內(nèi)膜異位癥進(jìn)行半根治手術(shù)或術(shù)中診刮的內(nèi)膜，獲得符合條件的病例共70例。根據(jù)納入標(biāo)準(zhǔn)獲得70例患者的異位內(nèi)膜及在位內(nèi)膜的石蠟標(biāo)本。實(shí)驗(yàn)

10、組為異位子宮內(nèi)膜，對(duì)照組為同一例患者的在位內(nèi)膜，通過免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)AQP1，2，5，8蛋白的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.AQP1在在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜的微血管中有豐富表達(dá)，在間質(zhì)細(xì)胞和腺細(xì)胞中無表達(dá)；在在位子宮內(nèi)膜組中，AQP2，5，8蛋白的表達(dá)主要位于子宮內(nèi)膜的腺上皮和腔上皮細(xì)胞；AQP2在間質(zhì)中無表達(dá)，AQP8在間質(zhì)中有少許表達(dá)，AQP5在間質(zhì)中有較弱的表達(dá)；在異位子宮內(nèi)膜中，AQP2，5，8的表達(dá)主要

11、在腺上皮和腔上皮細(xì)胞，在間質(zhì)中的表達(dá)略高于在位內(nèi)膜。2.在兩組中，AQP1，2，5，8的表達(dá)與月經(jīng)周期有關(guān)，在增生早期的表達(dá)較弱，增生晚期和分泌期的表達(dá)較強(qiáng)。3.光密度分析AQP1在分泌期的異位內(nèi)膜的表達(dá)高于在位內(nèi)膜；半定量分析AQP2，5，8在在位內(nèi)膜的表達(dá)顯著高于異位內(nèi)膜上的表達(dá)（P=<0.001，P=0.004，P<0.001）；4.AQP1，2，5，8在在位內(nèi)膜和異位內(nèi)膜的表達(dá)在增生期和分泌期無顯著性差異。
　　 結(jié)論：